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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1446 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 外周血 | 種屬來(lái)源 | 人 |
| 生長(zhǎng)特性 | 半懸浮細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人DC細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1446 |
組織來(lái)源 | 外周血 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 人 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性傳代 |
生長(zhǎng)特性 | 半懸浮細(xì)胞 | 細(xì)胞形態(tài) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
樹突狀細(xì)胞 ( Dendritic cells, DC) 是機(jī)體功能強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞 ，它能高 效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原 ，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力 ，成熟DC能有 效激活初始型T細(xì)胞 ，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。 DC的來(lái)源有兩條途徑： ①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC ，稱為髓樣 DC ，也稱DCl ，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞 ， 間 皮 (或真皮) DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等 ，②來(lái)源于淋巴樣干細(xì)胞 ，稱為淋 巴樣DC或漿細(xì)胞樣DC ，即DC2 ，與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。樹突狀 細(xì)胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子 ，是功能強(qiáng)大的 專職抗原遞呈細(xì)胞(APC)。 DC自身具有免疫刺激能力 ，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活 未致敏的初始型T細(xì)胞的APC。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人胰腺癌細(xì)胞AsPC-1(STR鑒定正確)
人食管癌細(xì)胞TE-7(STR鑒定正確)
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT-549(STR鑒定正確)
人支氣管良性腫瘤NCI-H727(STR鑒定正確)
人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1-A(STR鑒定正確)
大鼠肝星形細(xì)胞CFSC-8B（種屬鑒定）
大鼠垂體瘤細(xì)胞MMQ(種屬鑒定)
人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞 CCD841 CON (STR鑒定正確)
人卵巢癌細(xì)胞IGR-OV1 (STR鑒定正確)
人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞CCC-HEH-2(STR鑒定正確)
人肝癌細(xì)胞Hep 3B2.1-7(STR鑒定正確)
人胃癌細(xì)胞MKN-28(STR鑒定正確)
小鼠膀胱移行癌細(xì)胞MBT2（種屬鑒定）
小鼠白血病細(xì)胞P388（種屬鑒定）
大鼠肝癌細(xì)胞H4-II-E-C3（種屬鑒定）
Sporolactobacillus nakayamae subsp. nakayamae中山乳芽孢桿菌中山亞種
Aliivibrio fischeri費(fèi)氏另類弧菌
Sporolactobacillus terrae土乳芽孢桿菌
Xanthobacter autotrophicus自養(yǎng)黃色桿菌
Serratia sp.氏菌
Burkholderia pickettii皮氏伯克霍爾德氏菌
Arthrobacter chlorophenolicus氯酚節(jié)桿菌
Arthrobacter sulfonivorans食砜節(jié)桿菌
Arthrobacter citreus檸檬節(jié)桿菌
Arthrobacter nicotinovorans噬尼古丁節(jié)桿菌
人DC細(xì)胞Agromyces brachium細(xì)枝農(nóng)霉菌
Agromyces luteolus藤黃色農(nóng)霉菌
Lactococcus lactis subsp. cremoris乳酸乳球菌乳脂亞種
Agromyces mediolanus米蘭農(nóng)霉菌
Lactobacillus agilis敏捷乳桿菌
原代細(xì)胞使用方法：
是一種半懸浮細(xì)胞細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
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