大鼠外根鞘細胞的相關產品：小鼠肝實質細胞白僵菌Beauveriabassiana(Balsamo)Vuillemin小鼠肝外膽管上皮細胞葡萄孢Botrytissp.小鼠肝星狀細胞健強地霉GeotrichumrobustumFangetal.小鼠睪丸支持細胞漢遜德巴利酵母Debaryomyceshansenii(Zopf)LodderetKreger-vanRij

一、細胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養基：原代上皮細胞培養體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

原代細胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁生長細胞，細胞形態呈鋪路石狀細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
大鼠胚胎心肌細胞H9c2(2-1)（種屬鑒定）

人胃癌細胞 KATO III(STR鑒定正確)
敲除P53基因細胞株HCT116+P53
永生化人腦微血管內皮細胞hCMEC/D3 (STR鑒定正確)
人眼脈絡黑色素瘤細胞OCM1A(STR鑒定正確)
人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-28(STR鑒定正確)
人急性髓細胞性白血病細胞OCI-AML3(STR鑒定正確)
人甲狀腺癌細胞K1 (STR鑒定正確)
小鼠垂體促甲狀腺濾泡星狀細胞TtT/GF(種屬鑒定)
人肺腺癌細胞LTEP-α-2(STR鑒定正確)
小鼠乳腺癌細胞轉染4T1+OVA(STR鑒定正確)
大鼠脊髓前角運動神經元瘤細胞 VSC4.1（種屬鑒定）
人類星形膠質瘤耐替莫細胞U251MG+TMZ+luc(STR鑒定正確)
人正常前列腺上皮細胞RWPE-2(STR鑒定正確)
人結腸直腸腺癌細胞SW1417(STR鑒定正確)
Paenibacillus mucilaginosus膠凍樣類芽孢桿菌
Bacillus mycoides蕈狀芽孢桿菌
Bacillus niacini煙芽孢桿菌
Bacillus oleronius蔬菜芽孢桿菌
Bacillus pseudofirmus假堅強芽孢桿菌
Sporosarcina psychrophila嗜冷芽孢八疊球菌
Bacillus psychrosaccharolytic冷解糖芽孢桿菌
Bacillus pumilus短小芽孢桿菌
Bacillus schlegelii施氏芽孢桿菌
Bacillus shijiazhuanggensis石家莊芽孢桿菌
大鼠外根鞘細胞Bacillus smithii史氏芽孢桿菌
Bacillus simplex簡單芽孢桿菌
Bacillus sp.芽孢桿菌
Lysinibacillus sphaericus球形賴氨酸芽孢桿菌
Bacillus sporothermodurans生孢耐熱芽孢桿菌