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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠小腸隱窩上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1562 |
組織來源 | 小腸組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 上皮細胞樣 |
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
大鼠小腸隱窩上皮細胞分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內消化是至關重要的，因為食物經過小腸內胰液、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程，同時營養物質被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構成。其結構特點是管壁有環形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切；構成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主。小腸腔面的環行皺襞從幽門附近開始出現，在十二指腸末段和空腸頭段極發達，向下逐漸減少和變矮，至腸中段以下基本消失。粘膜表面還有許多細小的腸絨毛，是由上皮和固有層向腸腔突起而成，形狀不一，以十二指腸和空腸頭段發達。絨毛于十二指腸呈葉狀，于空腸呈指狀，于回腸則細而短。環行皺襞和絨毛使小腸表面積擴大20-30倍，絨毛根部的上皮下隱至固有層形成管狀的小腸腺，又稱腸隱窩，故小腸腺與絨毛的上皮是連續的，小腸腺直接開口于腸腔。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈上皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
猴腎細胞Marc145（種屬鑒定）
人骨髓橫紋肌肉癌細胞SJCRH30(STR鑒定正確)
人前列腺癌細胞22Rv1(STR鑒定正確)
人肺癌細胞CAL-12T(STR鑒定正確)
人卵巢癌細胞株COC1(STR鑒定正確)
人結腸癌細胞HCT-116(STR鑒定正確)
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)PC-12（種屬鑒定）
人急性淋巴細胞白血病細胞CEM/C1(STR鑒定正確)
人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat(STR鑒定正確)
人胚肺細胞 MRC-5(STR鑒定正確)
正常大鼠腎細胞（EGF受體陽性）NRK-49F（種屬鑒定）
人眼脈絡黑色瘤細胞胞c918(STR鑒定正確)
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1 (STR鑒定正確)
小鼠胚胎成纖維細胞Balb/3T3（種屬鑒定）
人淋巴母細胞帶熒光素酶T2(174×CEM.T2)+LUC(STR鑒定正確)
Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis德氏乳桿菌乳亞種
Lactobacillus fermentum發酵乳桿菌
Enterococcus faecalis糞腸球菌
Leuconostoc lactis乳明串珠菌
Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides腸膜明串珠菌腸膜亞種
Enterococcus faecium屎腸球菌
Enterococcus cecorum盲腸腸球菌
Enterococcus hirae海氏腸球菌
Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum腸膜明串珠菌葡聚糖亞種
Halorubrum saccharovorum噬糖鹽紅菌
大鼠小腸隱窩上皮細胞Haloferax mediterranei地中海富鹽菌
Haloferax gibbonsii吉氏富鹽菌
Haloferax denitrificans反硝化富鹽菌
Haloferax volcanii沃氏富鹽菌
Halococcus morrhuae鱈鹽古球菌
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