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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1546 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 心臟組織 | 種屬來(lái)源 | 大鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1546 |
組織來(lái)源 | 心臟組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi)，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜(房室瓣)，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽、尿素和尿酸等)，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。近年來(lái)大量研究表明，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和病理改變直接影響心肌細(xì)胞功能，也是諸多毒素、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細(xì)胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機(jī)制和細(xì)胞間旁分泌細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究中起著重要作用。 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)，明膠(0.1%)
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞DB(STR鑒定正確)
小鼠胰腺癌細(xì)胞帶熒光素酶 PANC02+LUC（種屬鑒定）
人急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞KG-1(STR鑒定正確)
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株PT-67（種屬鑒定）
人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞帶熒光素酶U87 MG+LUC（STR鑒定）
人胎盤(pán)細(xì)胞Hs 815.Pl(STR鑒定正確)
豬腎細(xì)胞系PK13（種屬鑒定）
人漿細(xì)胞白血病ARH-77(STR鑒定正確)
急性早幼粒細(xì)胞株NB4 (STR鑒定正確)
人咽鱗癌細(xì)胞FaDu(STR鑒定正確)
人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞SK-NEP-1(STR鑒定正確)
小鼠黑色素瘤細(xì)胞帶綠色熒光B16-F10+GFP（種屬鑒定）
人胚胎肌肉組織來(lái)源細(xì)胞CCC-HSM-2 (STR鑒定正確)
人肝癌細(xì)胞SNU368(STR鑒定正確)
人甲狀腺乳頭狀細(xì)胞TPC-1(STR鑒定正確)
Bifidobacterium gallicum高盧雙歧桿菌
Bifidobacterium indicum蜜蜂雙歧桿菌
Bifidobacterium choerinum豚雙歧桿菌
Bifidobacterium pseudocatenulatum假小鏈雙歧桿菌
Bifidobacterium saeculare波倫亞雙歧桿菌
Bifidobacterium coryneforme棒狀雙歧桿菌
Lactococcus lactis subsp. lactis乳酸乳球菌乳亞種
Bifidobacterium thermacidophilum subsp. porcinum嗜熱酸雙歧桿菌
Bifidobacterium gallinarum雞胚雙歧桿菌
Enterococcus durans耐久腸球菌
大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞Lactobacillus sp.乳桿菌
Clostridium thermocellum熱纖梭菌
Clostridium sp.梭菌
Enterococcus durans subsp. fox耐久腸球菌狐貍亞種
Micrococcus lylae里拉微球菌
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
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