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大鼠骨髓單核細胞

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5×10^57750元15 瓶 可售
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更新時間:2024-01-29 10:10:57瀏覽次數(shù):450

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
貨號 A01X1693 主要用途 僅供科研研究實驗
組織來源 骨髓 種屬來源 大鼠
生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 巨噬細胞樣
大鼠骨髓單核細胞的相關產(chǎn)品:大鼠前脂肪細胞噬甲基菌(加詞待譯)Methylophaga aminisulfidivorans大鼠乳腺成纖維細胞舞蹈擬土地桿菌Pseudopedobacter saltans大鼠乳腺上皮細胞奧托氏菌(加詞待譯)Ottowia pentelensis大鼠軟骨細胞中國臺灣別樣海源菌Aliidiomarina taiwanensis

詳細介紹

一、細胞基本屬性:

細胞名稱

大鼠骨髓單核細胞

商品貨號

A01X1693

組織來源

骨髓

產(chǎn)品規(guī)格

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

種屬來源

大鼠

傳代特性

不增殖;不傳代

生長特性

貼壁

細胞形態(tài)

巨噬細胞樣

 

包被條件: 

培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

傳代比例:不傳代

消化液:0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%

細胞簡介

大鼠骨髓單核細胞分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單核細胞是一種未成熟的單核細胞,在骨髓細胞中約占0.04%,被認為是破骨細胞的前體細胞,較外周血單個核細胞誘導的破骨細胞得率高、全骨髓誘導法產(chǎn)生的破骨細胞數(shù)量多,純度高,較脾細胞誘導法分化效率高。骨髓單核細胞(BMMNCs)是從股骨或脛骨骨髓中分離提取出來的原代細胞,它屬干細胞類型。目前,大多數(shù)研究用淋巴細胞分離液分離提取骨髓單核細胞,近也有采用免疫磁珠分離法分離骨髓單核細胞。

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原代細胞實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

QQ截圖20240123162116.png

原代細胞使用方法:

是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈巨噬細胞樣,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)經(jīng)1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi);

4)待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠大隱靜脈平滑肌細胞

小鼠多巴胺神經(jīng)元細胞
小鼠肺成纖維細胞
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞
小鼠肺大動脈平滑肌細胞
小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞
小鼠肺大靜脈平滑肌細胞
小鼠肺動脈成纖維細胞
小鼠肺泡巨噬細胞
小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞
小鼠肺血管平滑肌細胞
小鼠腹膜間皮細胞
小鼠腹腔巨噬細胞
小鼠肝動脈內(nèi)皮細胞
小鼠肝動脈平滑肌細胞
家園鬼傘Coprinus domesticus
裂蓋馬鞍菌Helvella leucopus
金龜子綠僵菌Metarhiziumanisopliae(Metschnikoff)Sorokin
塔賓曲霉Aspergillustubingensis(Schober)Mosseray
海棗曲霉Aspergillusphoenicis(Corda)Thom
泡盛曲霉AspergillusawamoriNakazawa
多主枝孢(蠟葉芽枝霉)Cladosporiumherbarum(Persoon)LinketFries
宛氏擬青霉Paecilomyces variotii
匍枝根霉Rhizopusstolonifer(Ehrenberg:Fries)Lind
聚多曲霉(薩氏曲霉)Aspergillussydowii(Bain.Etsart.)Thometchurch
大鼠骨髓單核細胞香蕉炭疽盤長孢菌GloeosporiummusarumCke.Mass
許旺酵母SchwanniomycesoccidentalisKlocker
卡爾斯伯酵母SaccharomycescarlsbergensisHansen
糖化酵母SaccharomycesdiastaticusAndrewsexGillilandexvanderwalt
滅酵母SaccharomycesbayanusSaccardo

 


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