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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠腸巨噬細胞 | 商品貨號 | A01X1582 |
組織來源 | 腸組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 巨噬細胞樣 |
細胞簡介 |
大鼠腸巨噬細胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至gang門的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經gang門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內大的微生態系統。巨噬細胞屬于免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞較易獲得，便于培養，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養，難以長期生存。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛(先天性免疫)和特異性防衛(細胞免疫)。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。 |
包被條件：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：利多ka因(12mM)
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
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原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈巨噬細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
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