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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔骨細胞 | 商品貨號 | A01X2138 |
組織來源 | 骨 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 橢圓形細胞，不規則細胞 |
包被條件：
培養基：原代成骨細胞培養體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
骨細胞是成熟骨組織中的主要細胞，相當于人的成年期，由骨母細胞轉化而來。當新骨基質鈣化后，細胞被包埋在其中。此時細胞的合成活動停止，胞漿減少，成為骨細胞。 骨細胞能產生新的基質，改變晶體液，使骨組織鈣、磷沉積和釋放處于穩定狀態，以維持血鈣平衡。骨細胞對骨吸收和骨形成都起作用，是維持成熟骨新陳代謝的主要細胞。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈橢圓形細胞，不規則細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat,CloneE6-1
小鼠T淋巴細胞；CTLL-2[CTLL2]
人急性單核細胞白血病細胞；J-111
人喉癌上皮細胞；Hep-2
人肺細胞；HLF-a
人宮頸癌細胞；HeLa
人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi
人急性單核細胞白血病細胞；THP-1
人肝癌細胞；Hep-3B2.1-7
非何杰金氏淋巴瘤細胞；Wien133
人急性T細胞白血病細胞；JurkatCA
人黑色素瘤細胞；M21
人外周血B淋巴細胞；IM-9
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞；NK-92MI[NK92MI]
人肝腹水腺癌細胞；SK-HEP-1
共生梭菌Clostridium symbiosum
構巢曲霉Aspergillus nidulans (Eidam) Winter
古氏副擬桿菌Parabacteroides goldsteinii
冠突散囊菌Eurotium cristatum
哈茨木霉Trichoderma harzianum
海分枝桿菌Mycobacterium marinum
海氏腸球菌Enterococcus hirae Farrow and Collins
海氏腸球菌定量菌株Quantitative strains of Enterococcus hirae
褐球固氮菌Azotobacter chroococcum Beijerinck
黑曲霉定量菌株Quantitative strains of aspergillus niger
兔骨細胞紅曲霉Monascus purpureus Went
紅色毛癬菌Trichophyton rubrum
黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium
灰黃青霉Penicillium grisofulvum Dierckx
灰葡萄孢Botrytis cinerea
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