兔海綿體內皮細胞的相關產品：人腦膠質細胞株(正常)，HEB細胞副干酪乳桿菌副干酪亞種Lactobacillus paracasei subsp. paracasei人腦微血管內皮細胞，HBMEC細胞副流感嗜血桿菌Haemophilus parainfluenzae人腦星形膠質母細胞瘤，U-87 MG細胞副流感嗜血桿菌基因組DNAGenomic DNA from Haemophilus parain

一、細胞基本屬性：

 

原代細胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。

原代細胞使用方法：

是一種貼壁細胞，細胞形態呈內皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
小鼠肝癌細胞；H22

小鼠纖維肉瘤細胞；WEHI 164
小鼠雜交瘤細胞；W6/32
小鼠腹水瘤細胞；S-180-S2D9
小鼠肝癌細胞；H22-H8D8
小鼠腹水瘤細胞；EAC-E2G8
小鼠淋巴瘤細胞；EL4
小鼠單核巨噬細胞白血病細胞；RAW 264.7 [RAW264.7
小鼠成肌細胞；C2C12
小鼠單核巨噬細胞；J774A.1
小鼠小腦組織細胞；C8-D1A
小鼠雜交瘤細胞；D19
小鼠雜交瘤細胞；16DC9
小鼠雜交瘤細胞；D61-18,IgA
小鼠雜交瘤細胞；19GD6
人腺病毒D38型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D37型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D36型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒B35型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒B34型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D33型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D32型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒A31型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D30型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D29型探針法熒光定量PCR試劑盒
兔海綿體內皮細胞人腺病毒D28型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D27型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D26型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D25型探針法熒光定量PCR試劑盒
人腺病毒D24型探針法熒光定量PCR試劑盒