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兔鞏膜成纖維細胞

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參考價4750
具體成交價以合同協議為準
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  • 所在地

    上海市

規格
5×10^54750元15 瓶 可售
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更新時間:2024-01-30 16:22:44瀏覽次數:372

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
貨號 A01X2237 主要用途 僅供科研研究實驗
種屬來源    
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詳細介紹

一、細胞基本屬性:

細胞名稱

兔鞏膜成纖維細胞

商品貨號

A01X2237

種屬來源

產品規格

5×105cells/T25細胞培養瓶

1.jpg

5.jpg


原代細胞實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻,鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中,置于37℃、5%CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基,隨后隔天換液。
QQ截圖20240123162116.png

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原代細胞使用方法:

是一種貼壁細胞,細胞形態呈內皮細胞樣在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;

4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化;

3)經1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養基重懸沉淀,接種于新的培養瓶內;

4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

 


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