化工儀器網
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠心肌成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1775 |
組織來源 | 心臟組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳2代左右 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
細胞簡介 |
小鼠心肌成纖維細胞分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數的70%，其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的心肌成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。近年來，人們逐漸了解到非心肌細胞不僅對心肌細胞具有結構上的支持、保護作用，而且還具有自分泌和旁分泌功能，影響心肌細胞的結構和生理功能；心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結構支持作用并負責細胞基質外的合成，當心肌損傷時能產生旁分泌生長因子。心肌成纖維細胞是心臟結締組織中常見的細胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞，其功能活動也得以恢復，參與組織損傷后的修復。因此，對心肌成纖維細胞的生理學研究成為現代心血管領域研究的一個重點。 |
包被條件：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
草魚腎細胞；GIK
斑馬魚尾鰭細胞；AB.9
幼蚊細胞；C6/36
蚊子幼蟲體細胞；Aedes albopictus clone C6/36
秋行軍蟲卵巢細胞Sf9克隆株；SSf-aSuper Spodoptera frugiperda a
昆蟲卵巢細胞；Sf21
草地夜蛾卵巢細胞；Sf9
昆蟲卵巢細胞；SF9
人卵巢顆粒腫瘤細胞
SK-GT-2
人正常胰腺導管上皮細胞株
人宮頸癌細胞
大鼠星形膠質細胞
人肺癌細胞
小鼠T淋巴細胞
對蝦傳染性皮下及造血組織壞死癥病毒（IHHNV）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦黃頭病毒（YHV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦桿狀病毒（BP）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
羅氏沼蝦諾達病毒（MrNV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
急性肝胰腺壞死病（AHPND/EMS）病原核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦偷死野田村病毒（CMNV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
斑節對蝦桿狀病毒（MBV）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
蝦肝腸胞蟲（EHP）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦壞死性肝胰腺炎（NHPB）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
小鼠心肌成纖維細胞哈維氏弧菌核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
赤點石斑魚神經壞死病毒（RGNNV）RNA核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
對蝦肝胰腺細小病毒（HPV）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
錦鯉皰疹病毒（KHV）核檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）
化工儀器網