產品簡介
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
---|---|---|---|
貨號 | A01X1934 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
組織來源 | 脾臟組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 長梭形細胞 |
上海撫生實業有限公司 |
—— 銷售熱線 ——
18201748966 |
參考價 | ¥7750 |
5×10^5 | 7750元 | 15 瓶 可售 |
更新時間:2024-01-30 09:41:43瀏覽次數:263
聯系我們時請說明是化工儀器網上看到的信息,謝謝!
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
---|---|---|---|
貨號 | A01X1934 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
組織來源 | 脾臟組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 長梭形細胞 |
一、細胞基本屬性:
細胞名稱 | 小鼠脾基質細胞 | 商品貨號 | A01X1934 |
組織來源 | 脾臟組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 長梭形細胞 |
包被條件:
培養基:原代成纖維細胞培養體系
換液頻率:每2-3天換液一次
傳代比例:
消化液:0.25%胰蛋bai酶
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介 |
脾是重要的淋巴器官,有造血、濾血、清除衰老血細胞及參與免疫反應等功能。也是淋巴細胞遷移和接受抗原刺激后發生免疫應到、產生免疫效應分子的重要場所。脾基質細胞是脾臟中結締組織細胞,起到為脾臟中實質細胞提供支持和營養的作用。 |
原代細胞實驗步驟:
一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中,去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻,鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。
加入DMEM培養液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中,置于37℃、5%CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基,隨后隔天換液。
原代細胞使用方法:
是一種貼壁細胞,細胞形態呈長梭形細胞,在技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的培養基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養;
4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化;
3)經1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養基重懸沉淀,接種于新的培養瓶內;
4)待細胞貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品:
人甲狀旁腺細胞
人甲狀腺成纖維細胞
人甲狀腺上皮細胞
人甲狀腺微血管內皮細胞
人角膜內皮細胞
人角膜上皮細胞
人角質形成細胞
人結腸癌細胞
人結腸成纖維細胞
人結腸間質細胞
人結腸平滑肌細胞
人結腸上皮細胞
人結腸粘膜上皮細胞
人結膜下囊成纖維細胞
人晶狀體上皮細胞
FS培養基
LS培養基
Culture培養基
瓊脂LT0
NGKG寒天基礎培地
GYP白亞瓊脂培養基
酪蛋白萄糖肉湯
支原體培養基
EG培養基
SBG增菌液
小鼠脾基質細胞BCP寒天培地(含瓊脂)
大豆胨酵母浸粉瓊脂(PYE)
革蘭氏陰性菌增菌液
卻普曼瓊脂
營養鹽瓊脂(AATCC30)