化工儀器網
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠三叉神經元細胞 | 商品貨號 | A01X1964 |
組織來源 | 腦組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 不建議傳代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 神經元細胞樣 |
細胞簡介 |
小鼠三叉神經元細胞分離自腦組織；三叉神經為十二對腦神經之中的第五對腦神經，是混合性腦神經之一。三叉神經由兩種纖維成分所組成。一種是一般軀體感覺纖維，其神經元胞體位于顱中窩顳骨巖部三叉神經壓跡處、由假單極神經元組成的三叉神經節內。三叉神經節的中樞突組成三叉神經感覺根，在腦干腦橋臂和腦橋基底部交界處入腦，傳到頭面部觸覺的神經纖維終止于三叉神經腦橋核，傳到溫覺、痛覺的神經纖維終止于三叉神經脊束核。另一種纖維是特殊內臟運動纖維，起源于特殊內臟運動核之中的三叉神經運動核，三叉神經運動核發出來的特殊內臟運動纖維成分組成三叉神經運動根，從腦橋臂和基底部交界處出腦，纖維成分加入到三叉神經第三大分支下頜神經內支配咀嚼肌等肌肉的運動。 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)
培養基：MSCM基礎培養基，FBS，Penicillin，Streptomycin等；
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產品：
兔冠狀動脈內皮細胞
兔冠狀動脈平滑肌細胞
兔海馬神經干細胞
兔海馬神經元細胞
兔海綿體內皮細胞
兔海綿體平滑肌細胞
兔頜下腺上皮細胞
兔滑膜成纖維細胞
兔滑膜間充質干細胞
兔肌腱成纖維細胞
兔肌腱干細胞
兔肌腱細胞
兔脊髓成纖維細胞
兔脊髓神經元細胞
兔脊髓微血管內皮細胞
D-阿拉伯糖-雙岐桿菌鑒定
乳糖-雙岐桿菌鑒定
松三糖-雙岐桿菌鑒定
棉子糖-雙岐桿菌鑒定
山梨-雙岐桿菌鑒定
淀粉-雙岐桿菌鑒定
萄糖鹽-雙岐桿菌鑒定
雙岐桿菌生化試驗無糖對照
山梨發酵管-O157菌生化鑒定
纖維二糖-O157菌生化鑒定
小鼠三叉神經元細胞MR-VP-O157菌生化鑒定
西蒙氏枸櫞鹽-O157菌生化鑒定
棉子糖發酵管-O157菌生化鑒定
萄糖（腦膜炎奈瑟氏菌專用）
麥芽糖（腦膜炎奈瑟氏菌專用）
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈神經元細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
化工儀器網