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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠滑膜間充質干細胞 | 商品貨號 | A01X1911 |
組織來源 | 正常關節組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維樣細胞 |
細胞簡介 |
滑膜是關節囊的內層，淡紅色，平滑閃光，薄而柔潤，由疏松結締組織組成。關節腔內的所有結構，除關節軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過關節腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。 關節軟骨一旦損傷將很難修復，運用自體軟骨細胞移植技術治療軟骨損傷，效果較好，但由于細胞來源不足以及取材造成的取材部位發生病變等因素，使其應用受到限制。 間充質干細胞（MSCs）具有高度增殖和多向分化潛能的特性。其中，滑膜中間充質干細胞的比例較高，少量的標本就可獲得足量的滑膜MSCs。此外，由于其具有比骨髓、脂肪等來源的MSCs更好的成軟骨、成骨、成脂肪等多分化能力和更強的集落形成能力等吸引了許多研究者對其進行深入研究。 |
包被條件：
培養基：原代間充質干細胞培養體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維樣細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
雜交瘤細胞株；AbM-F14FTSSCLS0167-KLH#15
人肝癌細胞；LIXC-501
雜交瘤細胞株；4F12
雜交瘤細胞株；7B5
雜交瘤細胞株；7F1
雜交瘤細胞株；1C6
小鼠骨髓干細胞系；MBMME1
雜交瘤細胞株；DC-C
小鼠骨髓干細胞系；MBMME2
雜交瘤細胞株；1C12
人成纖維細胞；HF-1
人食管鱗癌細胞系；ZEC-127
人食管鱗癌細胞系；ZEC-145
兔正常角膜上皮細胞；RNCEC/HL-032RabbitNormalCornealEpithelialCellsRNCEC/HL-032
人食管鱗癌細胞系；ZEC-166
察氏瓊脂
產毒培養基
高鹽察氏瓊脂
玉米粉瓊脂
孟加拉紅培養基
菌種培養基
四環檢定瓊脂
亞硫鹽瓊脂
布氏肉湯
改良Skirrow氏瓊脂基礎
小鼠滑膜間充質干細胞改良Camp-BAP氏瓊脂基礎
TTC瓊脂基礎
甘氨培養基
快速硫化氫試驗瓊脂
DNA甲基綠瓊脂基礎
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