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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人小腸成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1291 |
組織來源 | 小腸組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養 | 細胞形態 | 成纖維樣細胞 |
包被條件：
培養基：原代成纖維細胞培養體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
細胞簡介 |
小腸位于腹中， 上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連， 是食物消化吸 收的主要場所。一般根據形態和結構變化將小腸分為三段，分別為十二指腸，空 腸和回腸。小腸壁結構一般分4層，由外向內依次為：漿膜層， 平滑肌層，粘膜下 層和粘膜層。粘膜層又分為3層： 靠近粘膜下層的是一層平滑肌，稱為粘膜肌層。 其次為結締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細胞構成的粘 膜。 成纖維細胞是結締組織中常見的細胞， 電鏡下，成纖維細胞胞質內可見豐 富的粗面內質網、游離核糖體和高爾基復合體，表明其具有合成和分泌蛋白質的 功能。己知成纖維細胞的主要功能之一是合成膠原蛋白及其他細胞外基質， 在組 織器官纖維化過程中發揮重要作用。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁培養細胞，細胞形態呈成纖維樣細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產品：
人視網膜上皮細胞，ARPE-19細胞
人體肝癌細胞，YY8103細胞
人體腎臟細胞系，HEK-293T細胞
人外周血嗜堿性白血病細胞，KU812細胞
人微血管內皮細胞株，HMEC-1細胞
人胃癌細胞，AZ-521細胞
人胃癌細胞，HGC-27細胞
人胃癌細胞，MGC-803細胞
人胃癌細胞，MKN-1細胞
人胃癌細胞，MKN-45細胞
人胃癌細胞，N87細胞
人胃癌細胞，SNU216細胞
人胃黏膜上皮細胞，GES-1細胞
人胃腺癌細胞(低分化），BGC-823細胞
人胃腺癌細胞，AGS細胞
海豚鏈球菌Streptococcus iniae Pier and Madin 1976
海洋哺乳動物小鏈球菌Catellicoccus marimammalium
海洋分枝桿菌Mycobacterium marinum
海洋嗜殺酵母Wickerhamomyces anomalus
海源菌Idiomarina sp.
海云臺副球菌Paracoccus haeundaensis
海棗曲霉Aspergillus phoenicis
韓國叢毛單胞菌Comamonaskoreensis
韓國鞘氨醇單胞菌Sphingomonas koreensis
漢遜德巴利酵母Debaryomyces hansenii
人小腸成纖維細胞豪氏變形菌Proteus hauseri O'Hara et al.
好食脈孢菌Neurospora sitoplila
禾谷鐮孢菌Fusarium graminearum
禾谷鐮刀菌Gibberella zeae (Schwein.) Petch
禾谷絲核菌（小麥紋枯病菌）Rhizoctonia cerealis
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