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公司新品：β-Gal染色試劑盒使用說明說
點擊次數：2844 發布時間：2021-10-8
β-Gal染色試劑盒 (組織專用)?
貨號：R0757
規格：100T
保存：-20℃，避光，12 個月。
簡介：?β
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?(β-Galactosidase?Staining?Kit)是一種基于衰老時SA-β-Gal?(senescence-associated?β-galactosidase)活性水平上調而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老狀態。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。?
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物，光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞，對衰老前的細胞(presenescent?cells)、靜止期細胞(quiescent?cells)、永生細胞(immortal?cells)或腫瘤細胞等不會染色。對于組織切片或組織塊應采用冰凍切片，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定，對于普通的切片按每片1ml可以檢測100個樣品
組成：
名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑(A):?β-Gal?Fixative | 100ml | 4℃ |
試劑(B):?X-Gal?Solution | 5ml | -20℃ |
試劑(C):?β-Gal Staining?A?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(D):?β-Gal Staining?B?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(E):?β-Gal Staining?C?Solution | 100ml | 4℃ |
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自備材料：?
1、PBS或HBSS??
2、2、冷凍切片?
3、3、顯微鏡??
操作步驟(僅供參考)：?
1. 對于組織切片或非常小的組織塊，加入適當體積的β-Gal Fixative，染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊，固定時間應該適當延長。
2. 用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要適當延長。
3. 吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照下圖。
4. 37℃孵育20分鐘至2小時，或更長時間，直至部分細胞的顏色變藍。如果孵育時間較長，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發。
5. 吸除染色工作液，用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對于組織塊，時間還要相應延長。
6. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天。
方法參考下表比例：
名稱 | 體積 |
β-Gal Staining?A?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?B?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?C?Solution | 930ul |
X-Gal?Solution | 50ul |
說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。?4、37℃孵育2h至過夜，直至樣品顯藍色。可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發，最好把整個切片浸泡在染色工作液中，應注意37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。?5、普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。?
注意事項：?
1、?β-Gal?Fixative有一定的腐蝕性和氣味，操作時請注意防護。?
2、?β-Gal?染色反應依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養箱中進行染色反 應。用于細胞培養的二氧化碳培養箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值，而導致染色失敗。?
3、?配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。??
有效期：?12個月有效。? ?