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Incucyte® 實時活細胞分析系統是一款革命性的細胞成像設備，可以實現在培養箱內無限時間的連續觀察。用戶友好的實驗設置和分析，以及精準的各種細胞指標計算，使得許多用戶對它青睞有加。

Incucyte® 在細胞水平的體外實驗中有著廣泛應用。話不多說，讓我們用文章數量發話！

去除預印版，在2023年第三季度，陳老師收集到了國內近30個不同單位發表的40余篇文章，匯總如下（文獻列表在文末哦）。

表1. 2023 Q3 Incucyte® 發表文章第一作者單位分布

從文章的發表單位來看，許多單位發表了多篇文章，如：中山大學附屬第六醫院、復旦大學醫學院、四川大學華西醫院、北京協和醫學院等。利用Incucyte®，可以高效地獲取實時細胞信息，快速得到可信的研究成果。值得一提的是，中山大學附屬第六醫院僅在一個季度，就發了7篇文章！這足以說明Incucyte® 因其簡單易用、可在短時間內生成多個精確數據的優點，已然成為發表高分文章的利器！

Incucyte® 的應用范圍非常廣泛。從第三季度發表的文章上來看，除了傳統的細胞增殖活性和劃痕遷移實驗外，還包括血管生成等多種應用。與上半年相比，使用Incucyte® 發表的文章數量呈現有穩步增長的趨勢。

今天，陳老濕就挑選幾篇帶有新應用
國內文章進行介紹：

復旦大學 劃痕實驗基因篩選^[1]

^{表觀遺傳調節因子（ERF）的失調在腫瘤的進展中起著重要作用。為了確定哪種ERF有助于抑制結直腸癌（CRC）中的腫瘤細胞增殖或遷移，研究人員使用siRNA敲低了HT29細胞中的591種ERF基因，然后使用Incucyte® 高通量實時活細胞成像系統進行傷口愈合測定，以檢查腫瘤細胞的遷移能力。在這些ERF中，針對AF9的四個獨立的siRNA敲低AF9表達顯著促進了傷口愈合的能力。鋅指轉錄因子蛋白（SNAIL）被用作該篩選系統中的陽性對照。AF9在CRC中表現出下調，并與CRC患者的生存期延長呈正相關。體外和體內測定證明，AF9的消耗可以促進細胞增殖、遷移以及糖酵解。腸上皮細胞中MLLT3（AF9）的敲除顯著增加了嘧啶甲烷-葡聚糖硫酸鈉（AOM / DSS）誘導的腫瘤形成。}

591個基因，每個基因4種siRNA，還有復孔!一塊96孔板檢測6個基因，一共需要100塊96孔板，使用Incucyte® 一次性可以掃描6塊板并提供劃痕工具，還能迅速對劃痕平均距離等進行計算，這大大提高可劃痕測試通量。

華僑大學 病毒侵染測定^[2]

^{重組腺相關病毒（rAAV）是基因治療體內遞送中具有吸引力的載體，但其對細胞和組織的特異性限制了其在臨床上的應用。表皮生長因子受體-蛋白酪氨酸激酶（EGFR-PTK）能夠負調節rAAV轉導，使得EGFR陽性細胞幾乎不允許rAAV轉導。本研究構建了一種新型的rAAV-miRNA133b載體，該載體共表達miRNA133b（可敲低EGFR表達）和轉基因，并研究了其在體內和體外的轉導效率。通過使用Incucyte® 活細胞成像等方法，分析了miRNA133b對rAAV2轉導的影響及其機制。結果表明，miRNA133b可促進rAAV2轉導，且影響僅限于EGFR陽性細胞。而ss-rAAV2-Fluc-miRNA133b展現出了抗腫瘤作用。rAAV-miRNA133b載體可能成為一種有前景的平臺，用于遞送各種轉基因以治療EGFR陽性細胞相關疾病（如非小細胞肺癌等）。}

相比于流式方法，Incucyte® 無需進行消化細胞等預處理步驟；而與其他成像設備相比，它的操作簡單易用，并且能夠進行AI輔助分析。

中國科學院國家生物信息中心  血管生成^[3]

^{由于衰老的復雜性，我們的實際生物年齡并不總是與實際年齡一致，因此開發能準確評估衰老的工具顯得尤為重要。中國科學院國家生物信息中心劉光慧團隊建立了一個女性衰老時鐘，該時鐘包括了與免疫、脂質代謝、激素調節和組織健康相關的多組學水平的年齡相關特征。他們將30多歲到50多歲確定為女性老齡化的過渡期，認為這是監測衰老的重要時期。研究人員還發現，激素替代療法可以部分延緩幾個衰老時鐘的步伐，并緩解多種與衰老相關的標志物。在這項研究中，Incucyte® 主要用于檢測一些物質對主動脈內皮細胞(Human Aortic Endothelial Cells)的血管生成能力。}

^圖5. Incucyte® 的血管生成實驗發現：一些非激素類物質（肉豆蔻酸等）能增強血管生成能力

^{Incucyte® 有專門的血管生成分析模塊哦！}

^{中山大學癌癥中心 細胞共培養競爭模型測定[4]}

^{在細胞轉染后，建立轉染細胞與未轉染細胞的競爭生長模型對于衡量轉染細胞的生長增殖能力至關重要。這篇文章中引入了一種新的方法，稱為競爭性增殖測量（ComProliM），以準確量化細胞生長速率。該方法涉及共培養兩種不同類型的細胞，并定義了一個關鍵參數，即 ComProliM 指數 （CPMI）。CPMI 是兩種細胞數量比例對數和兩種細胞數量總數對數進行線性回歸的斜率。利用Incucyte® 設備，我們可以輕松實現這種檢測。每隔4個小時，我們測定兩種貼壁細胞（分別帶有紅色和綠色熒光）的數量（熒光面積），以同時判定兩種細胞的增殖。然后，我們使用每個時間點的兩種細胞數的比值的對數和兩種細胞總量進行線性回歸，從而計算CPMI。}

文中提到，相比于MTT、流式等終點法，Incucyte® 的方法具有通量高、操作簡單、可以在短時間內獲得大量數據的優點。

^{為什么Incucyte® 如此受歡迎呢？}

• 培養箱內無限時間的連續觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害

• 6個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養皿，通量高；比如第一篇和第四篇文章就用到了Incucyte® 的高通量優勢

• 高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數

• > 100種優化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的protocol

總而言之，您只管放好細胞，剩下的就交給Incucyte® 吧！