Incucyte® 實時活細(xì)胞分析系統(tǒng)是一款革命性的細(xì)胞成像設(shè)備，可置于培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中，對細(xì)胞進(jìn)行數(shù)天、數(shù)周甚至數(shù)月的長期分析，其強(qiáng)大的功能、易于操作的界面、精準(zhǔn)的多參數(shù)計算使得很多用戶對其愛不釋手，在細(xì)胞水平的體外實驗中有著廣泛應(yīng)用。截止至目前，應(yīng)用Incucyte® 發(fā)表的文章總數(shù)已經(jīng)超過了15,000篇！
近日，陳老師收集了2023年第四季度近30個單位發(fā)表的40余篇國內(nèi)文章（文獻(xiàn)列表見文末），就讓我們一起看看，哪個應(yīng)用最熱門吧。
北京航空航天大學(xué) | 1 | 中國科學(xué)院上海藥物研究所 | 1 |
南方醫(yī)科大學(xué) | 1 | 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院 | 1 |
泉州師范大學(xué) | 1 | 濱州醫(yī)學(xué)院 | 1 |
重慶大學(xué) | 1 | 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 | 1 |
中山大學(xué)附屬七院 | 1 | 華中科技大學(xué) | 1 |
重慶醫(yī)科大學(xué) | 2 | 暨南大學(xué) | 1 |
澳門大學(xué) | 4 | 上海仁濟(jì)醫(yī)院 | 2 |
上海交通大學(xué) | 2 | 浙江大學(xué) | 1 |
北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院 | 1 | 中山大學(xué)腫瘤防治中心 | 1 |
蘇州多瑪生物 | 1 | 南京中醫(yī)藥大學(xué) | 1 |
中國科學(xué)院水生生物研究所 | 1 | 復(fù)旦大學(xué) | 1 |
首都醫(yī)科大學(xué) | 1 | 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 | 1 |
百奧賽圖 | 4 | 華西醫(yī)院 | 1 |
中山大學(xué)附屬五院 | 3 | 沈陽藥科大學(xué) | 1 |
廣州生物島實驗室 | 1 | ||
表1. 2023 Q4 Incucyte® 文章第一作者單位分布
從文章的分布單位來看，很多單位在一個季度里就應(yīng)用Incucyte® 發(fā)表了多篇文章，比如中山大學(xué)附屬五院、澳門大學(xué)、百奧賽圖等。利用Incucyte® 可以高效地獲取實時細(xì)胞信息、快速獲得可信的研究成果，并且簡單易用，能在短時間內(nèi)生成多個精確數(shù)據(jù)，是文章發(fā)表的利器！也是實實在在可以買得起、用得好的儀器！
圖1. Incucyte® 應(yīng)用非常廣泛，從這些文章應(yīng)用方向上看，除了傳統(tǒng)的細(xì)胞增殖活性、劃痕遷移實驗，還有血管生成、3D拍攝等應(yīng)用。
接下來，陳老師就選幾篇帶有新應(yīng)用的國內(nèi)文章為大家一一介紹：
最多應(yīng)用
中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院
鼻咽癌新靶點(diǎn)[1]
自噬與鼻咽癌（NPC）放射耐藥有關(guān)。復(fù)制蛋白A1（RPA1）和RPA3是RPA復(fù)合物的底物，是逆轉(zhuǎn)鼻咽癌放射耐藥性的潛在治療靶點(diǎn)。然而，RPA在自噬中的作用尚未明確。為了揭示NPC細(xì)胞中RPA抑制劑（RPAi）藥理學(xué)和細(xì)胞毒性機(jī)制，以及RPAi介導(dǎo)的自噬調(diào)節(jié)NPC放射敏感性的潛在機(jī)制。文章鑒定了一種有效的RPAi（HAMNO），它在體外對NPC細(xì)胞系的放射敏感性增強(qiáng)和增殖抑制顯著相關(guān)。并發(fā)現(xiàn)RPAi通過誘導(dǎo)自噬流動、AMPK/mTOR通路激活和降低糖酵解功能的自噬相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄等多個水平上誘導(dǎo)自噬。將氯喹（CQ）治療或基因抑制自噬調(diào)節(jié)因子ATG5和RPAi治療相結(jié)合，可以協(xié)同抑制自噬，在增強(qiáng)NPC對輻射的抗腫瘤反應(yīng)方面比單獨(dú)使用任何一種方法更有效。本研究提出了一種新的治療策略，同時破壞RPA和自噬過程的藥理學(xué)抑制劑可提高鼻咽癌對輻射的反應(yīng)性。Incucyte® 在該文中被用來檢測腫瘤細(xì)胞、腫瘤球在藥物處理下的增殖、以及葡萄糖的內(nèi)吞等多個應(yīng)用。
圖2. 通過Incucyte® 檢測三種NPC細(xì)胞系的增殖發(fā)現(xiàn)，RPAi（HAMNO）可以加強(qiáng)放射治療IR的靈敏度
圖3. 通過2-NBDG指示劑和Incucyte® 檢測葡萄糖攝入，發(fā)現(xiàn)RPAi（HAMNO）可以抑制葡萄糖的攝入
圖4. 通過Incucyte® 檢測腫瘤球增殖發(fā)現(xiàn)，氯喹和RPAi（HAMNO）對腫瘤球成長的抑制具有協(xié)同作用
Incucyte® 可以拍攝和分析3D培養(yǎng)，比如腫瘤球和類器官。反正放在培養(yǎng)箱里拍攝，想拍多久就拍多久。
最新應(yīng)用
復(fù)旦大學(xué)
神經(jīng)退行性疾病新機(jī)制[3]
線粒體損傷的增加在許多神經(jīng)退行性疾病中起著關(guān)鍵作用，例如帕金森病（PD）和唐氏綜合征（DS）。因此，小分子化合物增強(qiáng)線粒體降解可能為解決這些疾病提供有希望的新策略。這篇文章探索了通過自噬拴系化合物（ATTEC）將線粒體靶向自噬來誘導(dǎo)線粒體清除的策略。證明雙功能化合物（mT1）同時與線粒體外膜蛋白 TSPO 和自噬體蛋白 LC3B 結(jié)合，可能會增強(qiáng)自噬體對受損線粒體的吞噬和隨后的自噬降解。初步實驗表明，mT1 在 PD 細(xì)胞模型和 DS模型中都減弱了疾病相關(guān)表型。本文證明了雙功能ATTECs降解線粒體的可能性，這證實了ATTECs降解細(xì)胞器的能力，并為干預(yù)線粒體相關(guān)疾病提供了潛在的新策略。Keima 是一種對 pH 敏感的雙激發(fā)熒光蛋白，對溶酶體蛋白酶具有抗性。酸性pH值下在620 nm處具有單個發(fā)射峰。Mito-Keima 通過線粒體的色素 c 氧化酶亞基 VIII （COX VIII）的靶向序列在線粒體上特異性表達(dá)。mito-Keima 可以指示線粒體是否已進(jìn)入溶酶體（pH 4.5）。本文通過Incucyte®和Keima來檢測線粒體自噬水平。
圖5. 通過Incucyte® 監(jiān)控紅色熒光發(fā)現(xiàn)，加入mT1抑制劑后，線粒體吞噬加強(qiáng)，但是敲除mT1的靶點(diǎn)TSPO再加入mT1后，mT1導(dǎo)致的線粒體吞噬減弱
只要有合適的熒光指示劑，Incucyte® 啥都能做！
最多數(shù)據(jù)
澳門大學(xué)
糖尿病新機(jī)制發(fā)現(xiàn)[3]
非程序性巨噬細(xì)胞極化，尤其是促炎性巨噬細(xì)胞的長時間激活，與糖尿病目標(biāo)的傷口愈合延遲有關(guān)。巨噬細(xì)胞來源的外泌體攜帶多種microRNA（miRNA），參與傷口愈合的不同階段。骨髓來源的原代巨噬細(xì)胞BMDM（M0-Exos）、干擾素γ加脂多糖極化 BMDM（M1-Exos） 和白細(xì)胞介素-4 極化 BMDM（M2-Exos） 中分離出外泌體。與 M0-Exos 相比，M1-Exos 損害了人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的遷移和微管形成，而 M2-Exos 表現(xiàn)出相反的效果。共鑒定出 63 個 miRNA 在源自極化 BMDM 的外泌體中差異表達(dá)。其中，miRNA-155-5p在M1-Exos中高表達(dá)，阻斷了HUVECs的血管生成。此外，miRNA-155-5p 直接與生長分化因子 6（GDF6） mRNA 的 3′ UTR 結(jié)合以抑制其蛋白表達(dá)。這項研究破譯了極化巨噬細(xì)胞外泌體中miRNA的表達(dá)譜。M2樣巨噬細(xì)胞衍生的外泌體和miRNA-155-5p抑制劑可能是治療糖尿病足潰瘍的有前途的藥物。
圖6. 左圖為不同來源外泌體對HUVEC的增殖影響，分別從總分支長度、節(jié)點(diǎn)數(shù)等來進(jìn)行統(tǒng)計；右圖為劃痕遷移實驗的結(jié)果
圖7. 左圖為miRNA-155-5p對HUVEC的劃痕遷移的影響；右圖為增殖實驗的結(jié)果，分別從總分支長度、節(jié)點(diǎn)數(shù)等來進(jìn)行統(tǒng)計
本文章數(shù)據(jù)很多，Incucyte® 一次性可以掃描6塊板并提供劃痕工具，還可以迅速對劃痕平均距離等進(jìn)行計算，大大提高了劃痕測試通量
為什么Incucyte® 那么火熱呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)無限時間的連續(xù)觀察，最短幾分鐘的間隔拍攝，自動化的圖像采集，減少人力，防止過多操作對細(xì)胞的傷害
6個板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
> 100種優(yōu)化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的Protocol
活細(xì)胞監(jiān)測：優(yōu)化高級細(xì)胞模型的工作流程
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-參考文獻(xiàn)-
[1] Targeting RPA promotes autophagic flux and the antitumor response to radiation in nasopharyngeal carcinoma. Journal of Translational Medicine，2023
[2] Targeted clearance of mitochondria by an autophagy-tethering compound (ATTEC) and its potential therapeutic effects.Science Bulletin.Volume 68, Issue 23, 15 December 2023, Pages 3013-3026
[3] Exosomal miRNA-155-5p from M1-polarized macrophages suppresses angiogenesis by targeting GDF6 to interrupt diabetic wound healing.Molecular Therapy - Nucleic Acids.Volume 34, 12 December 2023, 102074
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