你是否也常常遇到這些超濾實(shí)驗(yàn)的困擾?
流速太慢:離心機(jī)從晚上9點(diǎn)“肝”到凌晨2點(diǎn)半,快要崩潰!
濃縮失敗:心情糟糕,想哭,不是在做實(shí)驗(yàn),就是在實(shí)驗(yàn)失敗的路上。
過(guò)濾困難:離譜!PBS都濾不下來(lái),嚴(yán)重耽誤我的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度……
濾膜堵塞:誰(shuí)懂啊,給蛋白換液,堵了兩根超濾管還沒(méi)搞完,一天白干?
蛋白損失:離心完蛋白漏的干干凈凈,真的栓Q,難道是我的福報(bào)?
說(shuō)多了都是淚,好想擁有一支能力強(qiáng),效果拔群的超濾管!
別急,讓小賽來(lái)為你分憂解難。切記,在進(jìn)行樣品濃縮超濾之前,一定要做好正確的選型,并注意實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范哦!
如何避開(kāi)一個(gè)個(gè)超濾實(shí)驗(yàn)中的天坑,小賽準(zhǔn)備了20頁(yè)超長(zhǎng)實(shí)用資料《實(shí)驗(yàn)室過(guò)濾解決方案和實(shí)用工具合集》,涵蓋超濾選型和實(shí)用技巧,絕對(duì)是你實(shí)驗(yàn)室的得力助手!快來(lái)免費(fèi)下載吧!
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接下來(lái),讓我們看看超濾管有哪些常見(jiàn)的疑難困惑吧!
Q
如何根據(jù)我的樣品體積,選擇對(duì)應(yīng)的超濾產(chǎn)品?
賽多利斯超濾產(chǎn)品家族,可實(shí)現(xiàn)從0.1mL-5L體積范圍樣品的超濾和透析,且可以使用離心,加壓,加壓離心,以及切向流過(guò)濾(TFF)的方式進(jìn)行樣品處理。
Q
不同的超濾方式有什么特點(diǎn)和區(qū)別呢?
Vivaspin® 超濾管
常用的是離心方式,過(guò)程溫和,方便快速,可為大多數(shù)樣品溶液提供濃縮過(guò)濾,用于純化和濃縮蛋白質(zhì)、核酸、病毒、大分子和納米顆粒等
Vivaspin® 20和Vivaspin® 100超濾杯
可以在氣體壓力下運(yùn)行,Vivaspin® 20也可以通過(guò)加壓離心運(yùn)行,兩者相結(jié)合的處理時(shí)間通常比離心快30 %到50 %
Vivaflow® 切向流過(guò)濾膜包
能夠快速處理大體積樣品,減少濾膜堵塞,有效回收目標(biāo)分子。可拓展性強(qiáng),適用于濃縮、脫鹽、澄清和分離等多種操作
Q
超濾膜材質(zhì)多種多樣,都適合我的樣品嗎,我該如何進(jìn)行選擇呢?
小賽推薦4種膜材質(zhì),分別是聚醚砜(PES)、再生纖維素(RC)、改良的再生纖維素(Hydrosart® RC)和三醋酸纖維素(CTA)供大家選擇,如圖所示,快點(diǎn)擊打開(kāi)看看它們各自的“看家本領(lǐng)”吧!
Q
我目前做的是XXX樣品,有對(duì)應(yīng)的超濾管供選擇嗎?
當(dāng)然啦!賽多利斯的膜材質(zhì)和孔徑十分齊全,在選型正確的前提下,可以確保任何生物分子的最大回收率哦!
Q
如何選擇最佳的截留分子量(MWCO)呢?
一般的選擇原則是1/3;如果優(yōu)先考慮截留率,可選擇更小MWCO,如1/6;
如果優(yōu)先考慮流速,可選擇更大MWCO,如1/2。注意,不同品牌的截留分子量MWCO略有差異,不可簡(jiǎn)單照搬哦!
Q
我的樣品是核酸,如何把單位bp換算成對(duì)應(yīng)的截留分子量KDa呢?
MWCO截留分子量與nm納米 / bp值的換算關(guān)系如圖所示。
Q
超濾管使用過(guò)程中,對(duì)于離心機(jī)的擺放有什么要求?
超濾過(guò)程中,請(qǐng)注意離心力一定不要作用在膜上,水平轉(zhuǎn)子或角轉(zhuǎn)子的要求也不一樣哦,詳情請(qǐng)看圖示。
Q
使用不同超濾管時(shí)的離心力如何設(shè)置? 最大處理體積分別是多少?
做實(shí)驗(yàn)時(shí)需要調(diào)整離心力在超濾膜的承受范圍內(nèi),如果轉(zhuǎn)速太高,可能導(dǎo)致膜破裂。建議在超濾管中加入樣品時(shí)不要超過(guò)最大體積,以Vivaspin® Turbo 15為例,若使用水平轉(zhuǎn)子,樣品不得超過(guò)15mL,若使用角轉(zhuǎn)子則不超過(guò)9mL。
另外,建議核酸樣品的離心力比蛋白樣品離心力低一半左右。而如果是線性分子,在低的離心力條件下可以獲得更好的濃縮效果哦!
讓我們一起告別超濾實(shí)驗(yàn)的困擾,迎接更加順利的實(shí)驗(yàn)之旅!
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