AAmerican Diagnostica GmbH,ADI 公司
Freee Protein S ELISA (Cat.no 842)中文說明書
（中文說明書供參考，請以英文說明書為準）
簡介，檢測原理（略）
試劑盒組成：
試劑準備和保存
樣品收集和制備
檸檬酸抗凝的血小板缺乏的血漿或血清適用于該實驗。
血漿按以下方式制備：
檢測的樣本和Protein S control需用protein S 樣品稀釋液1:50稀釋，如果樣品濃度可能高于100%，需做高濃度稀釋。如果樣本濃度x＜10%，樣本只需做小于1:50低濃度稀釋
校準品制備
Free Protein S 濃度以占血漿百分比（%）表示，。100% Free Protein S濃度相當于：正常血漿（混合池）1:50稀釋后的濃度。
按一下方式制備校準品：
Free Protein S（%） | C | C/2 | C/4 | C/10 | C/20 | 0 |
校準品加入量 | 1ml | 0.5 ml | 0.25 ml | 0.1 ml | 0.05 ml | 0 |
校準品稀釋液加入量 | 0 ml | 0.5 ml | 0.75 ml | 0.90 ml | 0.95 ml | 1.0 ml |
充分混勻，標準品稀釋液室溫穩定性至少4個小時（18-25℃）
操作流程：
試劑 | 加入量 | 流程 |
Anti-Human Free Protein S-HRP | 100ul | 每孔加入100ul Anti-Human Free Protein S-HRP |
Protein S Standard diluted sample 或Protein S sample diuent(blank) | 100ul | 立即加入100ul ProteinS 標準品和檢測樣本至對應孔 |
室溫（18-25℃）孵育1小時（手動輕震板或振板器振板） | ||
Protein S 稀釋液 | 300ul | 洗板5次 |
TMB底物顯色液 | 200ul | 洗滌完畢后，立即每孔加入200ul底物顯色液 |
室溫（18-25℃）孵育5min() | ||
0.45M H2SO4 | 50ul | 加入0.45M H2SO4終止液 |
等待10min待顏色穩定，450nm測定吸光度，減去空白吸光度。 | ||
注意：
結果：
以Protein S 標準品濃度（%）做橫坐標，平均吸光度做縱坐標，每次檢測都需要重新做標準曲線，如圖所示。
計算：
從曲線可直接計算出ProteinS 的濃度（樣品按：1:50稀釋）。如果樣品做了高濃度的稀釋，需乘以對應稀釋系數D(例如：樣本做了1:100稀釋后，測值需乘以2，1:200稀釋后，測值需乘以4) 。如果做低濃度的稀釋，得到的檢測值需除以稀釋倍數。
檢測程序的局限性：
因為盒子內的單抗是鈣依賴性單抗，所以請用盒子里自帶的Wash Buffer (含鈣)。如果洗滌不充分，得到的樣品檢測OD值會很高，為避免非特異性顯色，請確保洗滌的充分性。
測值：
血漿中Protein S 濃度正常值：60-150%，因此非正常值＜60%。一般男性測值會高于女性，且隨年齡和血脂濃度增加。
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