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BD BiocoatTM 細胞檢測相關系統

閱讀:1093      發布時間:2014-3-23
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BD BiocoatTM 細胞檢測相關系統

Biocoat腫瘤侵襲系統

BD 產品貨號354166, 354165

儲存和運輸:-20度儲存,干冰運輸。

使用指南:

BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統由包被Matrigel基質的特殊材質BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養小室組合而成。BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統具有以下特點:提高腫瘤細胞侵襲實驗的通量;自動化非破壞式的熒光檢測;節約抗腫瘤轉移藥物篩選的時間和勞動力;高度可重復性:平均z’=0.7(24);平均z’=0.66(96);使用簡便:無需反復取液和操作,僅需加入細胞、標記物,然后直接讀板。

操作過程:

凍融

-20冰箱中取出產品,使其自然升溫到室溫。取出培養板在細胞小室內加入到500μL 37預熱的PBS37CO2環境下孵育2小時。解凍后,小心去除小室內的培養基,避免破壞Matrigel基質膜。

BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑后標記法

細胞通過侵襲消化基質膜后遷移到下小室,采用熒光標記定量細胞。細胞的侵襲能力用終點計算法計算得到。對于采用實時動力曲線的計算,推薦使用前標記法。

2.1 如步驟1準備培養板。

2.2 胰酶消化細胞單層后制得細胞懸液,溶于無血清DMEM培養基,推薦濃度為5×104 cells/mL。

2.3 上小室中加入500μL細胞懸液(2×104 cells)。

2.4 通過進樣口在下小室中加入750μL誘導劑。

2.5 37,5%CO2 條件下孵育培養板和對照板20-22小時(由細胞類型決定)。

2.6 孵育后,小心去除上小室中的培養基。避免破壞Matrigel基質膜。可以通過反扣住培養板,輕輕拍打,以使培養基的傾倒。

2.7 將培養小室轉移到另一塊24孔板中,該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素(溶于HBSS)。在37,5%CO2的環境下培養一小時。

3、DilC12(3)熒光染色劑預標記法

細胞接種于孔板之前先用染色劑標記,可用于均一化實驗,所產生的實時動力數據可揭示細胞通過基底膜侵襲的動力曲線,不需要分解和破壞各個時間點。

3.11.所示凍融。

3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBSDMEM中,37 1小時標記單層細胞。

3.3 胰酶消化細胞單層,制備細胞懸液,溶于無血清DMEM培養基,濃度為1×105 cells/mL。

3.4 上小室加入500μL細胞懸液(5×104cells)。

3.5通過進樣口在下小室加入750μL誘導劑。

3.6 37,5%CO2環境下孵育培養板和對照板18-24小時(由細胞類型決定)。在549激發波長和565nm發射波長條件下進行熒光讀數。

4、數據計算

侵襲率%=受趨化劑誘導通過Matrigel基質膜的細胞平均相對熒光值/受趨化劑誘導通過未包被FluoroBlok熒光膜的細胞平均相對熒光值×100

注意:數據可以用相對熒光值RFU或侵襲百分比表示,后者在標準化數據處理中更有用。背景扣除,計算平均背景值,將其從各個孔板中扣除。

 

自動化操作注意事項

BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養小室系統能適用于自動化操作系統。蓋子可以用標準機械手取走,也可用吸力取走。為了避免各孔間污染,孔板設定為一個統一的方向。為了與培養小室匹配,確保Falcon的商標均在2者上方,面向同一個方向。任何規格的槍頭都能達到小室的兩邊。包括50μL100μL,200μL250μL1000μL

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