產品簡介：

產品屬性：

CAS：3513-03-9

分子式：C17H27CIN8O5

分子量：458.9

純度：＞95%(HPLC)

儲存條件：-20℃

別名：滅稻瘟素

產品應用：

抗性基因：目前已經克隆和測序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是常用的篩選標志，用于哺乳動物和植物細胞的基因轉移實驗，也可用于E.Coli。

應用濃度：

1)Escherichia coli

E. coli對Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉化子對Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養基(pH 8)進行篩選，濃度范圍為50-100 μg/ml Blasticidin S。高的pH值可以提高Blasticidin S的活性。

2)哺乳動物細胞

哺乳動物細胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定佳使用濃度。

- 25-100 µg/ml in bacteria

- 1-30 µg/ml in mammalian cells

操作步驟(哺乳動物穩轉株篩選)

Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞中，在含有Blasticidin S的正常生長培養基中孵育，用于篩選穩定轉染細胞株。

(1)轉染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代(注：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作好。細胞密度太高，抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率不超過25%);

(2)每3-4天去除培養基，加入含抗生素的新鮮培養基;

(3)7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。

(4)轉移5-10個耐受克隆到35mm細胞盤中，加入選擇培養基維持培養7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。

儲存條件：-20℃，避免反復凍融，有效期一年。