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電鏡免疫膠體金―膠體銀染色法 江蘇泰諾源
電鏡膠體金―膠體銀染色(immunogold-sliverstaining)法系20世紀80年代創立的將免疫金染色和銀顯影2者結合而形成的一種新型檢測技術，可用于電鏡包埋前染色，Ted pella 膠體金和Ted pella膠體銀能*使用需求。
Ted pella 膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，有其*的優點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。同時Ted pella 膠體金在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能使用到。
膠體金―膠體銀染色法基本原理是*行免疫膠體金染色標記抗原，使其結合在組織細胞抗原所在位置，然后進行物理顯影，當顯影劑中的對苯二酚將銀離子還原成銀原子時，后者將圍繞金顆粒形成一個“銀殼”。“銀殼”本身亦具有催化作用，進一步促使更多銀離子還原，則使“銀殼”越來越大，抗原位置因此而變得清晰，抗原信號也得以放大，故此法是zui為敏感的細胞化學方法之一。因金顆粒的電子密度高，加之敏感性也高，故特別適合免疫電鏡的抗原研究。
電鏡膠體金―膠體銀染色法主要操作程序如下：
1. 組織固定后，5%、10%和20%系列濃度的蔗糖處理，制作冰凍切片，厚10～30gm；
2. 含1%正常羊血清或1%BSA的PBS室溫孵育20分鐘，封閉抗體非特異性結合部位；
3. 含1%氫硼化鈉的PBS孵育20分鐘；
4. *抗體孵育，可先置4℃，12～18小時，然后室溫1小時，使抗體充分滲透并結合；
5. PBS漂洗3次，每次5分鐘；
6. 0.1% BSA/PBS液(pH 8.2)漂洗5分鐘，為膠體金結合提供堿性環境；
7. 膠體金標記的第二抗體(pH 8.2)室溫孵育30～45分鐘，需摸索*稀釋度；
8. 硝酸銀液避光處理2―10分鐘，顯影時間根據實驗結果確定；
溶液配制方法：
硝酸銀液配制：雙蒸水60ml，枸櫞酸緩沖液10ml，對苯二酚1.0g溶于30ml雙蒸水，將三者混合，*溶解后，用前加入硝酸銀液2.0ml(含35mg硝酸銀)混勻；
枸櫞酸緩沖液的配制：枸櫞酸(C6 H8O-7H2 O)25. 5g，枸櫞酸三鈉(NaC6H5O7 2H2 0)23.5g，用雙蒸水溶解至100ml，即為pH 3.5的枸櫞酸緩沖液。
9. 解剖顯微鏡下選取免疫反應陽性部位。1%OsO4后固定30分鐘，雙蒸水漂洗；
10. 組織標本的脫水、樹脂包埋、超薄切片制作及電鏡觀察等方法同前述。
電鏡膠體金―膠體銀染色法主要優點：
該方法形成的金銀顆粒電子密度高，反差強，敏感度高；包埋前染色的標本可在解剖顯微鏡下選取陽性部位，結合半超薄切片的應用，能明顯提高工作效率，特別適于抗原含量少的組織細胞的免疫電鏡研究。缺點：顯影處理需在暗室進行，操作較繁瑣；而且增加包埋前免疫染色處理的步驟易導致非特異性著色；另外，單個金顆粒周圍結合的銀粒子不甚牢固，漂洗等處理容易脫離，半定量研究時應注意；此外銀等廢液直接流人下水道，容易導致環境污染。
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