HCT9/FU-GFP人結腸癌氟尿嘧啶耐藥株-綠色標記?操作步驟:
請收到細胞后,在倒置鏡下(建議在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
(二) (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1.棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱,之后翻轉培養瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明,收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注:1、觀察細胞建議在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否 則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。