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哮喘模型
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更新時間:2024-08-04 21:00:06

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哮喘模型
哮喘是一種由多種炎癥細胞及炎癥介質參與的氣道慢性炎癥性疾病,氣道炎癥、平滑肌功能紊亂和氣道重塑是哮喘的主要病理改變,發病率呈逐年增加趨勢。

 

哮喘模型

小鼠明礬OVA致哮喘模型
  哮喘是一種由多種炎癥細胞及炎癥介質參與的氣道慢性炎癥性疾病,氣道炎癥、平滑肌功能紊亂和氣道重塑是哮喘的主要病理改變,發病率呈逐年增加趨勢。
  現已發現有多種細胞因子參與哮喘發病的調控,其中關于Th1/Th2類細胞因子失衡學說為目前的研究熱點。IFN-γ、IL-4分別是Th2、Th2細胞的特征性細胞因子,在哮喘的發病機制中,IFN-γ和IL-4的不平衡是引起IgE產生異常和哮喘發病的重要因素,調節Th1細胞因子活性或抑制Th2細胞因子已成為哮喘防治探討的新熱點。的研究發現在抗原刺激后氣道上皮可以使前炎性細胞因子 IL-25 表達增加,促使 IL-4 及 IL-13等 Th2 細胞因子過量表達。

1.實驗動物
  SPF級Balb/C小鼠,雄性,周齡為4w~6w,體重為20g~22g。

2.實驗分組
  實驗分六組:正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組,每組15只動物。

3.主要試劑
  卵蛋白(OVA)
  明礬

4.實驗周期
  6W

5.建模方法
  5.1 明礬致敏佐劑:10%明礬溶液(溶于雙蒸水)2ml與500ug/ml OVA(溶于PBS)2ml等量混合后,用NAOH調PH值為6.5,室溫孵育60min,750r/min,離心5min,去掉上清液,重溶于2ml PBS。致敏時每只小鼠腹腔注射200ul,其中含2mg明礬和100ug OVA。
  5.2 致敏:小鼠分別于第0、14天時腹腔注射明礬致敏佐劑0.2ml,對照組注射相同劑量的PBS溶液,正常飲食飼養。
  5.3 激發:霧化吸入,第21天時小鼠放入有機玻璃箱,5% OVA霧化吸入。每天30min,共7d,zui后一次致敏后24h內檢測。以小鼠出現煩躁不安、呼吸急促、腹肌痙攣等陽性反應作為造模成功的標準。對照組采用PBS霧化吸入,其他操作均相同。
  5.4 末次激發24h麻醉小鼠,摘眼球取血,室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清,放入-80冰箱凍存。取左肺組織于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色;右肺組織液氮冷凍,-80℃保存用于分生標本。

6.模型評估
  6.1 一般觀察 組大鼠在激發開始后出現打噴嚏、點頭呼吸、呼吸急促、哮鳴音、腹肌收縮、煩躁等典型哮喘發作癥狀,并且后期觀察中發現飲食減少、毛色無光澤、行動遲緩及體重逐漸下降。
  6.2 支氣管肺泡灌洗液(BALF)的收集zui后1次激發24 h后(第28天)將各組小鼠頸椎脫臼處死,無菌條件下分離氣管,結扎左主支氣管后,剪開右主支氣管插入氣管導管并固定,無菌生理鹽水灌洗3次, 1mL/次,收集的BALF于4℃1200 r.min-1離心5 min,棄去上清液, PBS重懸細胞沉淀并涂片,進行細胞分類。
  6.3 肺組織病理學
  取左肺組織用4%多聚甲醛固定、脫水、石蠟包埋, 4μm切片,HE染色。正常組支氣管無明顯炎癥細胞浸潤,結構正常。哮喘組可見彌漫性細小支氣管和血管周圍炎性細胞浸潤,其中嗜酸細胞顯著增多。氣道上皮有不同程度脫落,支氣管豁膜上皮杯狀細胞增生,管腔內可見豁液栓及炎性滲出,支氣管平滑肌顯著增厚,血管周圍水腫。
  6.4 細胞因子的檢測
  模型組血清中IL-25、IL-4的含量顯著高于對照組。采用ELISA試劑盒檢測血清中IL-25、IL-4的含量。

 

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