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細胞成骨誘導
成骨誘導培養液配備與誘導操作:
1、準備含10%FBS的α-MEM培養液;
2、在備好的α-MEM培養液中添加50μM 抗壞血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松;
3、準備6孔培養板,將P4細胞按照5×103個/平方厘米的規格接種于原始α-MEM培養液中;
4、待細胞長至基本融合后,更換上述制備完成的成骨誘導培養液;
5、每三天換液一次,細胞長至7天時進行堿性磷酸酶染色;
6、二十八天后再進行礦化結節的茜素紅染色。
素紅染色方法介紹:
1、去除細胞當前使用培養液,使用PBS清洗兩次;
2、使用10%甲醛室溫固定15分鐘,完成后使用重蒸餾水沖洗兩次;
3、按照1ml/孔加入40mM的茜素紅染色液,室溫孵育20min并輕微振蕩;
4、清除掉沒有*結合的染料,用重蒸餾水漂洗并振蕩5min重復4次;
5、傾斜放置2min,吸取多余的重蒸餾水;倒置顯微鏡觀察拍照記錄。
實驗注意事項:
客戶提供:
細胞種類和誘導分化細胞類型。
收費標準/服務周期/提供結果:
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細胞成骨誘導
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