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細(xì)胞凋亡檢測(cè)/annexin V檢測(cè)/annexin V/PI檢測(cè)
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更新時(shí)間:2024-11-08 21:00:07

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)/annexin V檢測(cè)/annexin V/PI檢測(cè)
細(xì)胞凋亡(Apoptosis):多細(xì)胞有機(jī)體為調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程。多細(xì)胞生物體內(nèi),某些細(xì)胞的死亡是個(gè)體發(fā)育中一個(gè)預(yù)定的,并受到嚴(yán)格程序控制的正常組成部分。

 

細(xì)胞凋亡檢測(cè)

服務(wù)簡(jiǎn)介:

細(xì)胞凋亡(Apoptosis):多細(xì)胞有機(jī)體為調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程。多細(xì)胞生物體內(nèi),某些細(xì)胞的死亡是個(gè)體發(fā)育中一個(gè)預(yù)定的,并受到嚴(yán)格程序控制的正常組成部分。不同于一般的細(xì)胞壞死(cell necrosis)。細(xì)胞凋亡是指由基因控制的細(xì)胞自主有序死亡的主動(dòng)過(guò)程,涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。針對(duì)凋亡時(shí)期不同,檢測(cè)的方法有所不同。
    提供的細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)服務(wù)包括有Annexin V/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡和TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞晚期凋亡, 可用于檢測(cè)不同類(lèi)型、不同處理方式、不同時(shí)期細(xì)胞凋亡狀況及分析凋亡細(xì)胞比例。

一、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡——Annexin V/PI 雙染色法

原理:在細(xì)胞凋亡早期位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸(PS)遷移至細(xì)胞膜外測(cè)。磷脂結(jié)合蛋白V(Annexin V)是一種鈣依賴(lài)性的磷脂結(jié)合蛋白,它于PS具有高度的結(jié)合力。因此,Annexin V可以作為探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞外測(cè)的磷脂酰絲氨酸。故利用對(duì)PS有高度親和力的Annexin V,將Annexin V標(biāo)記上熒光素(如異硫氰酸熒光素FITC),用流式細(xì) 胞儀即可檢測(cè)凋亡細(xì)胞。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),膜上的PS外露早于DNA斷裂發(fā)生,因此Annexin V染色法檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡較TUNEL法更為靈敏;Annexin V染色法不需固定細(xì)胞,可避免PI染色因固定造成的細(xì)胞碎片過(guò)多及TUNEL法因固定出現(xiàn)的DNA片段丟失。因此,Annexin V法更加省時(shí),簡(jiǎn)單,結(jié)果更為可靠,是目前zui為理想的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。

二、TUNEL

 原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是熒光素(fluorescein)標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過(guò)氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的熒光素抗體特異性結(jié)合,后者又與HRP底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)反應(yīng)產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)(呈深棕色),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA斷裂,因而沒(méi)有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片)在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測(cè)。還可應(yīng)用于抗腫瘤藥的藥效評(píng)價(jià),以及通過(guò)雙色法確定細(xì)胞死亡類(lèi)型和分化階段。

服務(wù)流程:
Annexin V/PI雙染檢測(cè)調(diào)亡(適用于細(xì)胞早期凋亡檢測(cè))
1.細(xì)胞培養(yǎng)及接種
2.誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
3.細(xì)胞收集、計(jì)數(shù)
4.Annexin V/PI標(biāo)記
5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)
6.結(jié)果分析
TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡(適用于細(xì)胞晚期凋亡檢測(cè))
1.標(biāo)本預(yù)處理
2.內(nèi)源性過(guò)氧化物酶滅活
3.TdT酶反應(yīng)
4.生物素標(biāo)記
5.染色
6.封片觀察

 

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
詳談,我們會(huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

【本公司合作項(xiàng)目】
慢病毒,腺病毒,RNAi類(lèi),分子生物實(shí)驗(yàn),病理實(shí)驗(yàn),免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)等,能夠進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)評(píng)價(jià)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、病理檢測(cè)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測(cè)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析服務(wù)!

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