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A549/DDP-LUC-A549/DDP-LUC肺腺癌順鉑耐藥株-熒光素酶
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更新時間:2024-07-17 21:00:06

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A549/Taxol-LUC人肺癌紫杉醇耐藥株-熒光素酶標記操作步驟:
請收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
(二) (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1.棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,之后翻轉培養(yǎng)瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。
如果沒有特別說明,收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注:1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。3、有些細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。4、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。

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