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293T-LUC-人胚腎細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
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更新時(shí)間:2024-11-07 21:00:07

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293T-LUC人胚腎細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記操作步驟:
請收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(建議在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。
(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
(二) (二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1.棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。
如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。

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