甲基化檢測BSP/MSP法

服務簡介：

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要研究內容之一，它可以抑制基因的表達。甲基化通常發生在胞嘧啶的C5位，形成5-甲基胞嘧啶（5mC），甲基化的胞嘧啶多位于CpG島上。DNA甲基化在人的正常發育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病（如發育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經心理失調等）過程中發揮重要作用，已經成為表觀遺傳學和表觀基因組學的重要研究內容。該方法為甲基化檢測的金標準，可定量檢測基因甲基化水平。基因組DNA經亞硫酸氫鹽處理后，設計BSP引物擴增目的片段，zui后對PCR產物進行克隆并選取10個轉化子序 列，即可確定所研究的CpG區域的甲基化頻率。目前，基因的甲基化研究主要結合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術，分為甲基化特異性PCR（Methylationspecific PCR,MSP）和硫化測序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。

服務原理：
 BSP：甲基化的胞嘧啶在亞硫酸氫鈉發生脫氨基后不會轉變，用一對特異性引物擴增后測序，再與DNA原始序列比對確定甲基化位點。測序法克服了只能針對單個位點檢測，并且這些位點必須是限制性內切酶識別位點的缺點，可以對任何基因序列的甲基化狀態進行檢測。

MSP: 原理是基于DNA經亞硫酸氫鈉處理后，所有未甲基化的胞嘧啶發生脫氨基變為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則不變。基于這種堿基的改變，然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增，zui后通過瓊脂糖凝膠電泳分析，確定與引物互補的DNA序列的甲基化狀態。這種方法適于研究中大量樣本的DN***段，具有方便快捷，靈敏度高的優點，是目前較為常用的甲基化檢測方法。

服務流程：
1、根據目的基因啟動子序列設計相應的引物；        

基因組DNA的提取和定量；

亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA                 

修飾后DNA純化回收；

a.結合實時定量PCR的qMSP
   b.BSP，對PCR產物進行測序并與未經處理的序列比較；
6、數據處理                      

向客戶提供數據分析結果與實驗報告。

收費標準/服務周期/提供結果：
詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

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