miRNA過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建

服務(wù)簡(jiǎn)介：

    miRNA是一種21－25nt長(zhǎng)的單鏈小分子RNA, 是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成，miRNA具有高度的保守性、時(shí)序性和組織特異性.而且這種特異 性和時(shí)序性，決定了組織和細(xì)胞的功能特異性，表明miRNA在細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程的調(diào)節(jié)過(guò)程中起多種作用，因此miRNA的研究受到了生物學(xué)家的廣泛關(guān) 注。

 服務(wù)流程：
1、慢病毒過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建
設(shè)計(jì)上下游特異性擴(kuò)增引物，同時(shí)引入酶切位點(diǎn)，PCR(采用高保真KOD酶，3K內(nèi)突變率為0%)從模板中（CDNA質(zhì)粒或者文庫(kù)）調(diào)取目的基因CDS區(qū)（coding sequence）連入T載體。將CDS區(qū)從T載體上切下，裝入慢病毒過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體。
2、慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構(gòu)建
合成miRNA對(duì)應(yīng)的DNA頸環(huán)結(jié)構(gòu)，退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載體
3、慢病毒載體的包裝與濃縮純化
制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒，三種質(zhì)粒載體分別進(jìn)行高純度無(wú)內(nèi)抽提，共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后6 h 更換為*培養(yǎng)基，培養(yǎng)24和48h后，分別收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，病毒上清液通過(guò)超離心濃縮病毒。

客戶提供：
1、目的基因的序列信息；
2、病毒載體要求及選擇。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會(huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

【本公司合作項(xiàng)目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)等，能夠進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)評(píng)價(jià)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、病理檢測(cè)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測(cè)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析服務(wù)！

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