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microRNA實時定量PCR/miRNA實時熒光定量PCR/實時熒光定量PCR/QPCR
  • microRNA實時定量PCR/miRNA實時熒光定量PCR/實時熒光定量PCR/QPCR
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更新時間:2024-11-26 21:00:06

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microRNA實時定量PCR/miRNA實時熒光定量PCR/實時熒光定量PCR/QPCR
實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

 

microRNA實時定量PCR檢測服務

microRNA實時定量PCR/miRNA實時熒光定量PCR/實時熒光定量PCR/QPCR

實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。成熟miRNA是由21-25個核苷酸組成的小RNA,由于長度太短,不能通過傳統的實時定量PCR進行檢測。本公司通過特殊設計的莖環結構的反轉錄引物,配合實時定量PCR引物及探針可以精確檢測微量樣品中miRNA表達水平,也可以用終點PCR法定性檢測。

服務流程:
1.引物設計、合成
設計并合成目的miRNA的莖環RT引物、PCR引物和檢測用熒光探針,并合成該miRNA相應的DNA寡核苷酸作為標準。
2.樣品RNA抽提
a.組織樣品:取適量(50~100mg)新鮮組織或正確保存的組織樣品,勻漿后用PURELINKTM試劑抽提RNA。
b.細胞樣品:取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,吸去PBS后用PURELINKTM試劑抽提RNA。
3.RNA質量檢測
a.紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值,獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b.甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。
注:用于miRNA實時定量PCR檢測的RNA樣品,必須高純度、完整,沒有RNase 污染(降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測),同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.逆轉錄合成cDNA
利用莖環引物逆轉錄合成cDNA*鏈。
5.實時定量PCR
以合成的cDNA作為模板進行實時定量PCR擴增,梯度稀釋的標準同時進行實時定量PCR擴增,根據Ct值制備標準曲線。以同樣的方法測定每個樣品中U6 snRNA含量作為內參.
6.分析結果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結果,根據標準曲線定量樣品中的目的miRNA。提供實驗報告,包括詳細的實驗方法,實時定量PCR實驗數據和圖表

 

收費標準/服務周期/提供結果:
詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。

【本公司合作項目】
慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗等,能夠進行藥效學評價、毒理學評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學、代謝組學、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學分析服務!

 

 

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