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液氮罐之種子保存
液氮罐是超低溫保存方法之一，能夠達到零下196度的溫度
作者：液氮罐
2018-02-22 14:48:18
分類： 政策法規
標簽： 液氮罐
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種質資源庫的液氮罐低溫建設方法探討
種子資源整體建設長期保存，是減少外部環境破壞利用人工條件極大保存種質資源的方法。，主要 包括種子低溫保存，超低溫保存等*新前沿保存方法。利用液氮罐的種質資源保存是當今**的種質資源保存方法。也是*科學的保存方法。
液氮罐是超低溫保存方法之一，能夠達到零下196度的溫度，是長期保存種子的方法。這種方法是將種質材料(包括種子、組織體等)保存在-196℃的液氮環境中，讓種子生命休眠并保存生命活力在極低的溫度下，在液氮(-196℃)溫度下，任何的細胞生長都能夠長期的休眠停止，這也是認為目前為止的作為植物種子休眠保存的*好辦法。節省資源節省人力物力。
這是一種整套技術，能夠把物種溫度變溫到零下196度下并長久保存長久休眠，使其能夠保存其生命活力，待使用時能夠恢復其細胞生命力的技術方法。
一般來說，它包括以下6個步驟:
(1)前培養:對培養體短期的生長鍛煉處理，使其提高耐液氮保存的能力。
(2)防凍:培養體放入防凍液中，使其細胞降低冰點，減少因形成冰晶可能造成的損傷。
(3)變溫冷凍:按照不同變溫模式降溫冷凍，降溫速度依不同種質材料采用特定的速度。
(4)超低溫保存:將冷凍材料保存到有效低溫環境中，以防止冰的游移或解體。
(5)解凍：一般認為快速解凍更好。從液氮環境中取出封裝好的材料，與其容器一同放入+40℃的無菌水浴中，直到解凍后才回到室溫下，未封裝的材料放到20～30℃的液體培養基中解凍。
(6)生命力測定:如用TTC染色法等。
種子材料的超低溫保存，傳統的技術有干凍法、預凍法和兩步法，上世紀80年代末和90個代初玻璃化法和包埋脫水法開始應用于植物材料的超低溫保存。
干凍法:利用無菌空氣流、干燥硅膠或飽和溶液表面的氣相等對種質材料進行脫水處理，然后快速將其投入液氮貯存。
預凍法:將種質材料在添加保護劑(如蔗糖、二甲亞砜、甘油等)后置于低溫冰箱或液氮蒸汽箱(-10～-70℃)中冰凍若干小時后投入液氮貯存。
兩步法:種質材料在添加保護劑后，用程序降溫儀以某個速率(每分鐘0.1～0.5℃)降溫至轉移溫度(-40～-70℃)，然后投入液氮中貯存，兩步法較預凍法更為嚴格。
玻璃化法:種質材料用高濃度的復合冰凍保護劑處理后，快速投入液氮貯存，細胞直接用*濃度的保護劑脫水，在快速降溫時胞內胞外都進入玻璃化態，而不形成冰晶，從而避免了細胞結構的破壞。包埋脫水法:莖尖、分生組織和體細胞胚等種質材料用褐藻酸鈣包埋后，階段先在含高濃度蔗糖的培養基中脫水，第二步使用無菌空氣為其脫水，放入液氮罐長期保存