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更新時(shí)間:2024-08-19 20:24:49瀏覽次數(shù):3155評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 |
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貨號(hào) | BC1375 | 主要用途 | 總巰基含量檢測(cè) |
總巰基含量檢測(cè)試劑盒
生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì),而且參與活性氧清除,后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和 GSH 含量,能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。
巰基基團(tuán)與 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在 412nm 處有吸收峰。
總巰基含量檢測(cè)試劑盒
樣品的制備:
1. 按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2. 血清,培養(yǎng)液:直接測(cè)定。
操作步驟:
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 412nm,蒸餾水調(diào)零。
2、操作表對(duì)照管 測(cè)定管樣品(μL) 40 40 試劑一(μL) 150 150 試劑二(μL) 10 H2O(μL) 10 混勻,25℃靜置 10min,于微量石英比色皿/96 孔板,測(cè)定 412nm 吸光值。ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.7236 x,R 2 = 0.9994
1. 組織:
(1)按樣本重量計(jì)算總巰基含量(μmol/g)= 1.7236 ?A ×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 2.9×ΔA÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算總巰基含量(μmol/mg prot)= 1.7236 ?A ×V 反總÷(V 樣×Cpr) = 2.9×ΔA÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液:
總巰基含量(μmol/L)= 1.7236 ?A ×V 反總÷V 樣×103 =2900×ΔA V 反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積, 1mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;103 :1mmol/L=103 μmol/ L
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.8618x,R 2 = 0.9994 1.
組織:(1)按樣本重量計(jì)算總巰基含量(μmol/g)= 0.8618 ?A ×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=5.8×ΔA÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算總巰基含量(μmol/mg prot)= 0.8618 ?A ×V 反總÷(V 樣×Cpr)=5.8×ΔA÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液:總巰基含量(μmol/L)= 0.8618 ?A ×V 反總÷V 樣×103 =5800×ΔA V 反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積, 1mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;103 :1mmol/ L=103 μmol/ L
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