一、 分離方法說明及圖例
A.取1ml新鮮抗凝血,與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份本分離液之液面上;
B. 以500g(約1800轉/分)離心25分鐘(半徑15cm水平轉子)。
此時離心管中由上下細胞分四層。*層;為血漿層。第二層;為環(huán)狀乳白色的白細胞層。第三層;為
略帶混濁的分離液層(富集一定量的白細胞)。第四層;為紅細胞層。棄去*層血漿層,收集第二層細
胞、第三層分離液層和第四層紅細胞層,放入含細胞洗滌液10ml的試管中,充分混勻后,以500g約(1800
轉/分)離心30分鐘。沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細胞裂解液裂解紅細胞,再經(jīng)3次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片
后取沉淀細胞即為所需白細胞
注: 提取率約為80%。
二、 注意事項
A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結晶,影響分離效果。
B. 待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調節(jié)離心轉數(shù),調節(jié)離心的時間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
D. 好使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
E. 優(yōu)抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。
三、產(chǎn)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下