Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒

產品英文名：Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit

產品貨號：BC0960               產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/24樣                       產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：260
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：ATP酶活性檢測試劑盒|ATP檢測試劑盒|

簡要介紹：
Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP 水解生成ADP 和無機磷。
    根據Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP 酶活性高低。


產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水充分混勻待用，現用現配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四：液體2mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸水， 4℃保存。
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑八：液體15mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：10mmol/L 標準磷貯備液1mL×1 支，4℃保存。
0.5μmol/mL 標準磷應用液配制：將標準品 20倍稀釋，即取0.1mL標準品加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按H₂O: 試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現用現配。
注意：配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
    Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
    根據Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。
需自備的儀器及用品:
    可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長660nm，蒸餾水調零。
2、酶促反應（在EP管中加入下列試劑）

3定磷（1.5mLEP管中依次加入下列試劑）

                 混勻，40℃水浴10 min，冷卻室溫，在 660nm處比色。
三、計算
1、血清（漿）Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活力的計算:
定義：規定每小時每毫升血清（漿）中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力（U/mL）= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
2、組織、細菌或細胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：規定每小時每毫克組織蛋白中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺- ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/ mg)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷（Cpr×V樣）÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：規定每小時每克組織中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
定義：規定每小時每1萬個細菌或細胞中Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/10⁴)= C標準管×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
    C標準管：標準管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應總體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL ；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意事項：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管只能測 24份Ca⁺⁺ Mg⁺⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關鍵。
3、空白管和標準管只要做一管。

相關文獻：
《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29901074
《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者:Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影響因子:4.106 PMID:

Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒