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更新時(shí)間：2024-08-23 21:26:33瀏覽次數(shù)：1921評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | SR4110 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
| 主要用途 | SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結(jié)合的熒 |
PCR試劑 SYBR Green I核酸染料（PCR級(jí)，10000X）
貨號(hào)：SR4110
規(guī)格：50/100ul
保存：-20℃避光保存，有效期少一年。
產(chǎn)品說(shuō)明 ：
SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結(jié)合的熒光染料，是熒光定量 PCR 常用的 DNA結(jié)合染料。在定量 PCR 中，SYBR Green I 可與雙鏈 DNA（dsDNA）非特異性結(jié)合后發(fā)出熒光，則可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的 SYBR Green I 熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè) PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。游離狀態(tài)下，SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光，一旦與 dsDNA 結(jié)合，其熒光增加 1000 倍，一個(gè)反應(yīng)發(fā)出的全部熒光信號(hào)與出現(xiàn)的 dsDNA 量成比例，且會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物的增加而增加；所以通過(guò)檢測(cè) PCR 反應(yīng)液中的熒光信號(hào)強(qiáng)度，可以對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量，同時(shí)還可以測(cè)定擴(kuò)增的目的 DNA 段的熔解溫度。
使用說(shuō)明 ：
使用時(shí)，配置PCR反應(yīng)混合液， 將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應(yīng)體系， 使終濃度為0.5× （0.2×到 1×之間調(diào)整） 。以上操作建議在冰上進(jìn)行。
注： ① 反應(yīng)液配制方法和 PCR 擴(kuò)增條件請(qǐng)參照 DNA 聚合酶使用說(shuō)明。
② Realtime PCR 擴(kuò)增儀的使用方法，請(qǐng)參照各儀器說(shuō)明書(shū)。
注意事項(xiàng) ：
使用濃度對(duì)熒光 PCR 結(jié)果的影響
SYBR Green I 的使用濃度是保證熒光定量 PCR 實(shí)驗(yàn)成功非常關(guān)鍵的因素。如果 SYBR Green I 的濃度過(guò)低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低，這就意味著低拷貝的樣品可能無(wú)法檢出；而在高濃度時(shí)，將會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)，降低PCR 反應(yīng)效率。所以一般在使用 SYBR Green I 時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度，反應(yīng)的終濃度為 0.2×到 1×之間。
鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用。 我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí)，鎂離子濃度比無(wú) SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)高出 0.5～3mM。
相關(guān)產(chǎn)品 ：
PC2440 Random
PC2450 Oligo T16
G8142 GoldView ‖型核酸染?劑 (5000×)
SY1040 SYBR Green ‖ (10000×)
PC1100 Taq DNA Polymerase
PC1300 Pfu DNA Polymerase
PC2100 dNTPs Mix(2.5mM each)
PC2200 dNTPs Mix(10mM each)
SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡(jiǎn)單：無(wú)須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低?？蛇m用于多種電泳分析。
用QPCR來(lái)做miRNA的擴(kuò)增其實(shí)是一件比較難的事，因?yàn)閙iRNA是只有18-23個(gè)堿基的單鏈RNA，普通的PCR擴(kuò)增方法是無(wú)法直接用的，所以目前有兩種主流的解決思路：
方法1、設(shè)計(jì)頸環(huán)引物，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，然后結(jié)合探針的方法在PCR擴(kuò)增時(shí)進(jìn)行熒光定量，這種方法以ABI公司為代表，優(yōu)點(diǎn)是擴(kuò)增特異性好，缺點(diǎn)是成本太高，所以ABI的miRNA技術(shù)服務(wù)是很貴的
方法2、通過(guò)在miRNA 3‘端進(jìn)行加A，以延長(zhǎng)片段的長(zhǎng)度，然后通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的RT引物反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，后用SYBR為熒光染料進(jìn)行定量PCR，此法優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格便宜，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，尤其對(duì)低豐度miRNA的檢測(cè)要明顯優(yōu)于探針?lè)ǎ蝗秉c(diǎn)是特異性稍差，不過(guò)近研究發(fā)現(xiàn)miRNA 的3’端有多樣性。
總的來(lái)說(shuō)方法2要好于方法1 ，因?yàn)橐坏﹎iRNA 3‘端增加或減少一兩個(gè)堿基，頸環(huán)引物則無(wú)法使用，也就是說(shuō)方法1只能檢測(cè)某種miRNA的一種序列。
PCR試劑 SYBR Green I核酸染料（PCR級(jí)，10000X）
參考文獻(xiàn)：
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong，Xiaoyu Hou，F(xiàn)engsui Liu，Hong Tao，Yunjia Zhang，Hang Zhao，Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影響因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu，Jianhui Cai，Zhigui Zuo，Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者:Liu Lin，Yu Ye，Xiumei Zhu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31202170
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