您好, 歡迎來到化工儀器網
產品簡介
詳細介紹
非洲豬瘟快速檢測設備價格PCR儀廠家
非洲豬瘟快速檢測實驗室方案
用于非洲豬瘟病毒檢測的實驗室，推薦配置以下設備：II級生物安全柜、高速離心機、低溫冰箱、高壓蒸汽滅菌器、恒溫水浴鍋、組織勻漿儀、移液器、PCR儀、迷你型離心機。同時，建議實驗室配備合適的個人防護用品，如防護服、手套、口罩等。
非洲豬瘟快速檢測實驗步驟：
1.樣品處理
血液樣品直接用；
淋巴結、脾臟、扁桃體樣品，用無菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品2.0 g于研缽中充分研磨，再加10.0 mL PBS（pH 7.2，含1萬單位青霉素和1萬單位鏈霉素）混勻（樣品不足2.0 g按1:5比例加PBS），對處理的待檢樣品置70℃，30 min滅活后，3 000 r/min，4 ℃離心5 min，取上清液，編號備用；血球粉處理同上，只不過省掉研磨步驟。
2.豬瘟檢測樣品存放
采集或處理好的樣品在2℃～8℃條件下保存應不超過24 h；若需長期保存，須放置-80 ℃冰箱，但應避免反復凍融（凍融不超過3次）。
3.非洲豬瘟快速檢測操作步驟
3.1 病毒DNA的提取（使用A盒）
（1）待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數總和用n表示，取n個滅菌的1.5 mL離心管，逐管編號。
（2）每管加入Buffer A 500 L。
（3）每管分別加入已處理的待檢樣品、陽性對照、陰性對照各200 L，充分混勻，室溫放置10分鐘。
（4）取與上述離心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管，編號。將離心管中的溶液轉移至DNase-Free吸附柱，（為避免堵塞吸附柱，盡量不要吸懸浮雜質）。
（5）13000 r/min室溫離心30 sec。
（6）棄去收集管液體，將吸附柱放回收集管中。
（7）吸附柱內加入600 μL Buffer B，13000 r/min離心30 sec。
（8）棄去收集管液體，將吸附柱放回收集管中。
（9）重復步驟（7），（8）。
（10）13000 r/min空柱離心2 min，去除殘留液。
（11）將每個吸附柱分別移入新的1.5mL離心管中，向柱*加入50 μL Buffer C，室溫靜置1 min，13000 r/min離心30 sec，離心管中液體即為模板DNA。獲得的DNA溶液，冰上保存備用（注意提取的DNA須在2 h內進行PCR 擴增，若需長期保存須放置-80 ℃冰箱，但應避免反復凍融）。
3.2 非洲豬瘟快速檢測用熒光PCR擴增（使用B盒）
（1）從試劑盒中取出熒光PCR反應液、Taq酶，室溫融化后，2 000 r/min離心5 sec。設所需PCR管數為n（n = 樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照），每個測試反應體系需要20 μL 熒光PCR反應液和0.5 μL Taq酶。計算好各試劑的使用量，加入一適當體積小管中，充分混合均勻后，向每個PCR管中各分裝20 μL。
（2）分別向上述PCR管中加入1.3.1（11）中制備的DNA溶液各5μL，蓋緊管蓋，500 r/min 離心30 sec。
（3）將加樣后的PCR管放入熒光PCR檢測儀內，作好標記。反應參數設置：
*階段，預變性95℃/3 min；第二階段，95℃/15 sec，52℃/10 sec，60℃/35 sec共45個循環。熒光收集在第二階段每次循環的60℃延伸時進行。
非洲豬瘟快速檢測設備廠家型號價格等更多詳細信息及豬瘟檢測技術問題歡迎聯系我們