細(xì)胞類型	推薦凍存后接種密度（活細(xì)胞/cm²)	培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)板zui低數(shù)量
HUVEC	2500	≥5 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask
HUVEC-XL	2500	≥12 x T-225 flasks OR
Non-HUVEC Endothelial	5000	≥2 x T-25 flasks OR ≥1 x T-75 flask
備注	基于zui低細(xì)胞數(shù)量和活力估算。更準(zhǔn)確接種數(shù)量和活性見COA。	只要能達到接種密度，也可以使用其他規(guī)格的培養(yǎng)板。

2.根據(jù)推薦接種密度，估算細(xì)胞培養(yǎng)容器的數(shù)量和有效表面積。

3.按1 ml/5 cm²在培養(yǎng)容器中添加LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基，并且在37°C±1°C, 5% CO₂, 90%±2% 濕度條件下預(yù)孵至少30分鐘。

4.打開前先用酒精或異丙醇擦拭凍存管。在無菌環(huán)境下，快速扭開蓋子1/4再旋緊。 37°C水浴解凍凍存管，小心不要浸沒管子。隨時關(guān)注管子，zui后一點冰也融化后就馬上拿出管子。如果細(xì)胞解凍超過2分鐘，會影響實驗結(jié)果。

注意：不能用離心方法分離細(xì)胞和凍存保護液。這個動作比培養(yǎng)中的DMSO殘留更傷害細(xì)胞。

5.使用微量移液器小心混勻細(xì)胞懸液，加入培養(yǎng)容器。小心混勻。放回37°C±1°C, 5% CO₂, 90%±2% 濕度培養(yǎng)箱。

注意：內(nèi)皮細(xì)胞比其他細(xì)胞更容易貼凍存管壁。要轉(zhuǎn)移全部細(xì)胞需要額外施力（more forceful

trituration）。

LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞復(fù)蘇規(guī)程由紅榮微再翻譯整理。

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LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基是原LONZA內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基的加強版，優(yōu)化用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（ HUVECs）培養(yǎng)，擴增加速。包含2%FBS和BBE。不含外源VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）。

LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基需要混合CC-5036和CC-4542兩個組份。

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品牌	貨號	產(chǎn)品描述	包裝
LONZA	CC-5035	EGM-Plus BulletKit (CC-5036 +CC-4542 ) LONZA CC-5035 EGM-Plus內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基	1 Kit
LONZA	CC-5036	EBM-Plus Endothelial Cell Basal Medium-Plus 內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加強版	500mL/瓶
LONZA	CC-4542	EGM-Plus SingleQuots 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，加強版	Kit

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