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RetroNectin 逆轉錄技術和T細胞擴增方法

閱讀:9351發布時間:2018-1-15

 

RetroNectin逆轉錄技術操作流程

RetroNectin技術可以顯著提高逆轉錄病毒的轉染效率,這一發現克服了向造血干細胞中導入基因的困難。現在,RetroNectin技術已成為使用逆轉錄病毒進行轉染操作的常規選擇,其操作流程大致如下:

 

1. 注射用水或滅菌蒸餾水充分溶解RetroNectin,調節濃度至1mg/ml。

2. 0.22 μm濾膜過濾RetroNectin溶液,分裝后-20 ℃保存。

3. 用緩沖液將RetroNectin溶液稀釋至20~100 μg/ml。

4. 將RetroNectin稀釋液加入24孔板,每孔0.5 ml (建議用PBS緩沖液稀釋RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。

5. 室溫放置4小時或4 ℃,避光,過夜。

6. 吸出RetroNectin溶液,每孔加入PBS終止液0.5 ml。

7. 室溫放置30分鐘。

8. 加入適量PBS清洗孔板。

9. 吸出清洗液,得到RetroNectin包被的孔板 (如果暫不使用,可以在孔中加入適量PBS,用膠膜將平板蓋密封,避免RetroNectin干燥,可于4 ℃保存4周。使用前將PBS吸出) 。

10. 逆轉錄病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。

11. 將病毒液加入包被后的24孔板,每孔300 μl。

12. 32 ℃放置4小時。

13. 吸出病毒保存液。

14. 每孔加入待轉染的細胞懸液400 μl (通常細胞濃度為1 × 105/ml) 。

 

RetroNectin刺激T細胞擴增方法

 

 

T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.

 

1.  RetroNectin和CD3單克隆抗體包被培養袋。

2.  同時,來自PBMC的T細胞用GT-T551培養基+IL-2+血漿培養。

3.  第4天,T細胞轉移到培養袋,繼續用GT-T551培養基+IL-2+血漿培養。

4.  第7天,添加更多GT-T551培養基+IL-2。

5.  第10天,分裝兩個培養袋,添加更多GT-T551培養基+IL-2。

 

RetroNectin® 重組人纖維蛋白片段

RetroNectin®是在大腸桿菌中產生的重組人纖維蛋白片段FN CH-296。 當包被在培養瓶培養板表面時,RetroNectin®能顯著增強逆轉錄病毒介導的基因轉移到哺乳動物細胞中。RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和CD3單抗共同作用可刺激T細胞的增殖和分化

 

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包裝

TAKARA

T100B

RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment

重組人纖維蛋白片段

2.5mg

TAKARA

T100A

0.5mg

TAKARA

T201

RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment

重組人纖維蛋白片段GMP級

2.5 mg 凍干粉

 

*

 

品牌

貨號

產品描述

包裝

TAKARA

GT-T551 H3

淋巴細胞、DC細胞、NK細胞無血清培養基

1000 ml

 

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