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Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品的比較
閱讀：2712發(fā)布時(shí)間：2018-2-6
Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品的比較
Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝支持NK細(xì)胞的快速擴(kuò)增，NK細(xì)胞產(chǎn)量高（約8.6 萬(wàn)億，擴(kuò)增290倍），細(xì)胞殺傷力強(qiáng)（效應(yīng)細(xì)胞：靶細(xì)胞=5:1 下殺傷力77.9%），與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品相比很有優(yōu)勢(shì)。
比較項(xiàng)目 | 競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品B： NK 試劑盒 | 競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品C： NK 培養(yǎng)基 | |
接種容器 | 預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶 | 提供包被劑 | 沒(méi)有提供培養(yǎng)瓶和包被劑 |
組份 | Pre-coated T-75 flask 抗體預(yù)包被T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶 50 mL NK細(xì)胞活化培養(yǎng)基 1.8 mL NK細(xì)胞活化添加劑 1L NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基 | 1mL包被劑 80mL活化培養(yǎng)基 2 L擴(kuò)增培養(yǎng)基+1 mL 添加劑 | 500mL 培養(yǎng)基/瓶 |
操作友好度 | 方法清除，操作簡(jiǎn)單 | 沒(méi)有zui終方法，NK培養(yǎng)需要自行優(yōu)化 | 沒(méi)有方法 |
抗凝劑兼容性 | 肝素，檸檬酸鈉 | 肝素 | 肝素，檸檬酸鈉 |
細(xì)胞產(chǎn)量（14天，30mL 血樣） | 約 3 萬(wàn)億 | 約 0.64萬(wàn)億 | 約 4.2 萬(wàn)億 |
擴(kuò)增倍數(shù) | 約100倍 | 約32倍 | 約140倍 |
CD3-CD56+表型，14天 | 83% | 68% | 6% |
NK效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量 | 約2.5萬(wàn)億 | 約0.4萬(wàn)億 | 約0.3萬(wàn)億 |
細(xì)胞殺傷力（ET=5:1，靶細(xì)胞K562） | 77.9% | 54.1% | 57.6% |
培養(yǎng)體積 | 1.5L | 1.0L | 1.0L |
周期 | 14天 | 14天 | 14天 |
Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝可以用于NK細(xì)胞的大量擴(kuò)增，并且具有高活力和高殺傷能力。Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝飽和預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶，KBM NK活化培養(yǎng)基，KBM NK活化添加劑和KBM NK擴(kuò)增培養(yǎng)基。前三個(gè)特別設(shè)計(jì)用于NK活化，zui后一個(gè)KBM NK擴(kuò)增培養(yǎng)基于NK細(xì)胞擴(kuò)增。NK活化培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基生產(chǎn)都是使用高質(zhì)量試劑和cGMP級(jí)的原料。培養(yǎng)基唯二所含培養(yǎng)基是注射級(jí)的血清白蛋白和重組人胰島素。
介紹
自然殺傷細(xì)胞（NK）是重要的免疫細(xì)胞，能識(shí)別并清除腫瘤和病毒感染。體外大量培養(yǎng)NK細(xì)胞，滿足過(guò)繼性免疫治療所需一向比較困難。據(jù)資料，現(xiàn)有的培養(yǎng)方法都是采用擴(kuò)增培養(yǎng)基搭配細(xì)胞因子（IL-2，IL-7，IL-15）的方案，需要研究者自行優(yōu)化后使用。
Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法，所得NK細(xì)胞擴(kuò)增能力強(qiáng)，活性和殺傷能力高。研究者無(wú)需優(yōu)化，而且使用步驟精簡(jiǎn)。和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品比較了NK細(xì)胞產(chǎn)量，活力和NK 細(xì)胞體外 陽(yáng)性表達(dá)比率和殺傷能力。
鑒定方法
免疫表型
收獲細(xì)胞表面標(biāo)記表達(dá)評(píng)估方法：CD3-CD56+陽(yáng)性率。
100 μL PBS 加入 1 x 106 個(gè)細(xì)胞，CD3 FITC +CD56 PE抗體染色 20min，染色過(guò)程 室溫避光。孵育后，PBS 緩沖液清洗細(xì)胞，200 μL PBS 重懸，用于流式細(xì)胞分析。每個(gè)樣本收集1萬(wàn)個(gè)events，再用histogram overlay subtraction method using BD Accuri C6 軟件。
CCK-8 細(xì)胞毒性檢測(cè)
K-562 細(xì)胞作為靶細(xì)胞。1 x 105 cells/mL的K-562 細(xì)胞和 5 x 105 cells/mL的效應(yīng)細(xì)胞共培養(yǎng)（96孔培養(yǎng)板三份，終體積200 μL/孔），37°C 過(guò)夜。分析前，每孔添加20 μL細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑（ Cell Counting Kit-8 solution ，CCK8, Sigma Cat. No. 96992）， 37°C ，5% CO2孵育1 h。數(shù)據(jù)讀?。篠pectraMax® M4 (Molecular Devices) multifunction microplate reader。
結(jié)果
圖1 使用不同品牌的NK擴(kuò)增試劑盒比較細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和擴(kuò)增能力。與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品B，C相比，Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝擴(kuò)增能力具有優(yōu)勢(shì)。
圖2 CCK-8 細(xì)胞殺傷活性檢測(cè)。NK細(xì)胞與K-562細(xì)胞共培養(yǎng)16 h后（效應(yīng)細(xì)胞：靶細(xì)胞=5:1 ），Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝培養(yǎng)的NK 細(xì)胞殺傷能力77.9%，比競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品B (54.1%) 和C(57.6%) 有優(yōu)勢(shì)。
圖3 流式細(xì)胞分析NK細(xì)胞表面標(biāo)志物。使用CD3-CD56+陽(yáng)性率評(píng)估收獲細(xì)胞中NK細(xì)胞占比。Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝占比83.0%，高于競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品B (67.6%)和C(6.4%)。
結(jié)論
Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝支持NK細(xì)胞的快速擴(kuò)增，NK細(xì)胞產(chǎn)量高（約8.6 萬(wàn)億，擴(kuò)增290倍），細(xì)胞殺傷力強(qiáng)（效應(yīng)細(xì)胞：靶細(xì)胞=5:1 下殺傷力77.9%），與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品相比很有優(yōu)勢(shì)。
Corning NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法。無(wú)需優(yōu)化，而且使用步驟十分精簡(jiǎn)。
原文：Zhu Xuejing, Liu Jian Corning Incorporated
Corning Life Sciences Asia Technology Center Shanghai 201206, China
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