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[供應]T100B-TAKARA RetroNectin 重組人纖維蛋白，296
RetroNectin®是在大腸桿菌中產生的重組人纖維蛋白片段FN CH-296。 當包被在培養瓶和培養板表面時，RetroNectin®能顯著增強逆轉錄病毒介導的基因轉移到哺乳動物細胞中。
RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和激發型CD3單抗協同作用可以刺激T細胞擴增。
產品英文名：TAKARA RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)，FN CH-296
產品中文名：TAKARA RetroNectin®重組人纖維蛋白片段，FN CH-296
RetroNectin® 重組人纖維蛋白片段
RetroNectin®是在大腸桿菌中產生的重組人纖維蛋白片段FN CH-296。 當包被在培養瓶和培養板表面時，RetroNectin®能顯著增強逆轉錄病毒介導的基因轉移到哺乳動物細胞中。
RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和激發型CD3單抗可分別與T淋巴細胞上的VLA和TCR結合，兩者共同作用激活酪氨酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。
組份
RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 0.5 mg (Cat. #T100A)
RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 2.5 mg (Cat. #T100B)
RetroNectin is provided as a sterile 1 mg/ml solution.
[Form] Sterile solution containing 12.5 mM sodium citrate (pH 6.2) and 1.25% sucrose
儲存
-20℃
Caution: Freezing and thawing can be repeated up to 10 times
品牌 | 貨號 | 產品描述 | 包裝 |
TAKARA | T100B | RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖維蛋白片段 | 2.5mg |
TAKARA | T100A | 0.5mg | |
TAKARA | T201 | RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖維蛋白片段，GMP級 | 2.5 mg 凍干粉 |
*：
品牌 | 貨號 | 產品描述 | 包裝 |
TAKARA | GT-T551 H3 | 淋巴細胞、DC細胞、NK細胞無血清培養基 | 1000 ml |
訂購RetroNectin歡迎您咨詢華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 。紅榮微再*代理TAKARA CellArtis ，Rubicon產品。紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。
RetroNectin原理
RetroNectin是重組人纖維蛋白片段FN CH-296，包括細胞結合域，肝磷脂結合域和CS1位點三個功能區域。它由574個氨基酸組成，分子量63 kDa。RetroNectin能夠大幅地提高逆轉錄病毒感染哺乳動物細胞的感染效率，其作用原理是：細胞表面VLA-4及VLA-5可分別與RetroNectin上的CS-1位點及細胞結合域結合，逆轉錄病毒載體可以與肝磷脂結合域結合。在經RetroNectin包被的培養容器表面，細胞與病毒載體以高濃度共存，從而提高基因轉染效率。RetroNectin®重組人纖維蛋白片段和激發型CD3單抗可分別與T淋巴細胞上的VLA和TCR結合，兩者共同作用激活酪氨酸激酶pp125FAK，通過Ras途徑刺激T細胞的增殖和分化，使其獲得上千倍的增殖。
RetroNectin逆轉錄技術操作流程
RetroNectin技術可以顯著提高逆轉錄病毒的轉染效率，這一發現克服了向造血干細胞中導入基因的困難。現在，RetroNectin技術已成為使用逆轉錄病毒進行轉染操作的常規選擇，其操作流程大致如下：
1. 注射用水或滅菌蒸餾水充分溶解RetroNectin，調節濃度至1mg/ml。
2. 0.22 μm濾膜過濾RetroNectin溶液，分裝后-20 ℃保存。
3. 用緩沖液將RetroNectin溶液稀釋至20～100 μg/ml。
4. 將RetroNectin稀釋液加入24孔板，每孔0.5 ml (建議用PBS緩沖液稀釋RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。
5. 室溫放置4小時或4 ℃，避光，過夜。
6. 吸出RetroNectin溶液，每孔加入PBS終止液0.5 ml。
7. 室溫放置30分鐘。
8. 加入適量PBS清洗孔板。
9. 吸出清洗液，得到RetroNectin包被的孔板 (如果暫不使用，可以在孔中加入適量PBS，用膠膜將平板蓋密封，避免RetroNectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前將PBS吸出) 。
10. 逆轉錄病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
11. 將病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。
12. 32 ℃放置4小時。
13. 吸出病毒保存液。
14. 每孔加入待轉染的細胞懸液400 μl (通常細胞濃度為1 × 105/ml) 。
RetroNectin增強T細胞擴增技術流程
T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.
1. RetroNectin和CD3單克隆抗體包被培養袋。
2. 同時，來自PBMC的T細胞用GT-T551培養基+IL-2+血漿培養。
3. 第4天，T細胞轉移到培養袋，繼續用GT-T551培養基+IL-2+血漿培養。
4. 第7天，添加更多GT-T551培養基+IL-2。
5. 第10天，分裝兩個培養袋，添加更多GT-T551培養基+IL-2。
PBMCs and autologous plasma were prepared using 50 ml of blood from two healthy volunteers with informed consent. PBMCs from each donor were split into two samples to test anti-CD3-antibody- and IL-2-induced expansion with or without RetroNectin reagent (RN). CultiLife 215 bags (CultiLife 215 Culture Bag, Cat. No. FU0005) were coated with either anti-CD3 antibody plus RN or anti-CD3 antibody alone in PBS for 2 hr, then rinsed three times with PBS. On Day 0, PBMCs were resuspended in 50 ml of GT-T551 medium supplemented with heat-inactivated plasma (0.6% final volume) and added to the coated CultiLife 215 bags. Additional GT-T551 medium supplemented with IL-2 and plasma was added to each CultiLife 215 bag to reach a final volume of 250 ml. The PBMCs were transferred to CultiLife Eva bags (GT-T610 [CultiLife Eva] Culture Bag, Cat. No. FU0010) on Day 4 and fresh GT-T551 medium (with IL-2 and 0.6% inactivated plasma) was added to bring the volume to 500 ml per bag. An additional 500 ml of medium supplemented with only IL-2 was added on Day 7. On Day 10, cells were split into two CultiLife Eva bags, with fresh medium and IL-2 added to bring the final volume of each bag to 1,000 ml. The cells were harvested on Day 14, the total number of T cells was counted, and the proportion of naïve (CD45RA+/CCR7+) T cells was determined by flow cytometry analysis.
PBMC：人外周血單個核細胞
參考文獻
1) Kimizuka F,et al.Production and characterization of functional domains of human
fibronectin expressed inEscherichia coli. J Biochem. (1991) 110: 284-291.
2) Hanenberg H, et al. Colocalization of retrovirus and target cells on specific fibronectin fragments increases genetic transduction of mammalian cells.Nat Med. (1996) 2: 876-882.
3) Hanenberg H, et al. Optimization of fibronectin-assisted retroviral gene transfer into human CD34+ hematopoietic cells.Hum Gene Ther. (1997) 8: 2193-2206.
4) Pollok KE,et al.High-efficiency gene transfer into normal and adenosine deaminase-deficient T lymphocytes is mediated by transduction on recombinant fibronectin fragments.J Virol. (1998) 72: 4882-4892.
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[1]張慧穎. RetroNectin活化的細胞因子誘導的殺傷細胞治療晚期原發性肝癌的臨床研究[D].鄭州大學,2014.
[2]蔣盼,曠世佳,劉興光,肖棟濤,楊菁,張雁,汪華.冷凍聯合iCIK細胞治療口腔惡性黑色素瘤的T細胞免疫效應分析[J].中華臨床醫師雜志(電子版),2013,7(11):4944-4949.
[3]徐本玲,袁龍,高全立,范瑞華,張成娟,宋永平.重組纖維連接蛋白誘導自體CIK聯合IFN-α治療晚期肝癌療效[J].鄭州大學學報(醫學版),2011,46(05):694-696.
[4]張興華. 剔除調節性T細胞增強RAK過繼免疫治療機制的研究[D].北京協和醫學院,2011.
[5]張興華,袁偉,趙晨,馬潔,趙平.R etronectin和CD3mAb聯合培養CD56~+細胞用于治療胰腺癌的研究[J].實用腫瘤雜志,2011,26(02):113-118.
[6]韓穎,于津浦,李慧,曹水,任寶柱,齊靜,安秀梅,張廼寧,任秀寶,郝希山.重組人纖維蛋白片段對CIK細胞增殖的影響及其可能機制研究[J].中國腫瘤臨床,2010,37(02):71-75.
[7]杜微麗. 纖維連接蛋白誘導的CIK細胞的生物學特性和殺瘤活性的實驗研究[D].中國醫科大學,2009.
[8]任瑋,王志華.重組人纖維蛋白片段誘導CIK的增殖及對肺癌耐順鉑細胞的殺傷作用[J].生物工程學報,2008(08):1373-1380.
[9]楊建民,Michael S Friedman,李嶠,James J Mule,Alfred E Chang,Kevin T McDonagh.轉染嵌合性T細胞受體基因小鼠T淋巴細胞的體外抗腫瘤作用[J].中國腫瘤生物治療雜志,2006(04):243-248.
文獻簡述
Retronectin重組人纖維蛋白除了提高逆轉錄轉染效率，還能在CD3單克隆抗體的協作下，刺激T細胞、CIK細胞和RAK細胞等的擴增。
Information: T-cell expansion by RetroNectin stimulation RetroNectin reagent has been widely used to enhance retroviral and lentiviral gene transfer into mammalian cells.
In addition, RetroNectin reagent enhances the proliferation of T lymphocytes. T cells are conventionally expanded in the presence of Interleukin-2 (IL-2) by stimulation with anti-CD3 antibody. The addition of RetroNectin in this stimulation step dramatically increases the efficiency of T cell expansion. In addition, T cells expanded with this method contain a high proportion of less-differentiated T cells (naive T cells). Naive T cells have the ability to differentiate into cytotoxic T cells in vivo.
[1] 張慧穎. RetroNectin活化的細胞因子誘導的殺傷細胞治療晚期原發性肝癌的臨床研究[D].鄭州大學,2014.
研究發現，重組人纖維蛋白（RetroNectin-RN）聯合抗CD3單克隆抗體體外包被培養和擴增CIK細胞時可以使CD3Ab與T細胞的接觸和黏附進一步增加，不僅可以縮短細胞培養時間，而且可進一步提高細胞的培養效率并避免CIK細胞殺傷活性的降低。
關鍵詞：晚期原發性肝癌; RetroNectin; CIK; 臨床研究;
[2] 任瑋,王志華.重組人纖維蛋白片段誘導CIK的增殖及對肺癌耐順鉑細胞的殺傷作用[J].生物工程學報,2008(08):1373-1380.
Retronectin重組人纖維蛋白對CIK細胞有很強的激活作用,可使其細胞增殖總數達524.77倍,其主要效應細胞CD3+CD56+可達(31.40±1.91)%;對肺癌耐順鉑細胞DDP-A549的殺傷作用明顯高于其親代藥物敏感株A549(P<0.01)。但兩組CIK細胞對靶細胞的殺傷率在相同效靶比時無明顯差異(P>0.05)。RetroNectin能顯著增強CIK增殖活性,但對CIK細胞的殺傷活性并無明顯影響。CIK能夠顯著抑制DDP-A549的生長,可用于耐順鉑肺腺癌的免疫治療。
關鍵詞：細胞因子誘導的殺傷細胞; RetroNectin; 增殖; 肺癌細胞; 殺傷活性;
[3] 韓穎,于津浦,李慧,曹水,任寶柱,齊靜,安秀梅,張廼寧,任秀寶,郝希山.重組人纖維蛋白片段對CIK細胞增殖的影響及其可能機制研究[J].中國腫瘤臨床,2010,37(02):71-75.
重組人纖維蛋白片段（RetroNectin）能夠通過調控細胞周期,抵抗凋亡而促進CIK細胞增殖,其機制可能為RetroNectin與CIK細胞上VLA-4及VLA-5兩個位點結合進而通過Vav1蛋白作為第二信號活化T細胞。
關鍵詞：重組人纖維蛋白片段; CIK細胞; Vavl;
[4] 張興華. 剔除調節性T細胞增強RAK過繼免疫治療機制的研究[D].北京協和醫學院,2011.
Retronectin重組人纖維蛋白和CD3mAb聯用所培養獲得RAK細胞具有較強的增殖能力,培養后細胞表型絕大多數是CD3+CD8+T細胞。在RAK細胞培養前加以調節性T細胞剔除的步驟,能夠在此基礎上進一步放大細胞增殖和殺傷能力。
關鍵詞：調節性T細胞; 過繼免疫治療; Retronectin;
[5] 張興華,袁偉,趙晨,馬潔,趙平.R etronectin和CD3mAb聯合培養CD56~+細胞用于治療胰腺癌的研究[J].實用腫瘤雜志,2011,26(02):113-118.
CD3mAb和Retronectin重組人纖維蛋白聯合培養CD56+細胞的方法能夠提高細胞的增殖效率和殺傷活性,具有良好的臨床細胞治療應用前景。
關鍵詞：胰腺腫瘤/治療; 殺傷細胞,天然; 免疫療法,過繼; 細胞,培養的; 重組融合蛋白質類; 單核細胞/免疫學;
[6] 尹健. 外周造血干細胞純化、體外擴增及多藥耐藥基因轉染的實驗研究[D].天津醫科大學,2003.
利用逆轉錄病毒作載體將多藥耐藥基因導入造血干細胞，在轉染中予細胞因子支持，并利用Retronectin重組人纖維蛋白以提高轉染效率。在SCF+IL一3+FL+TPO+EPO的支持下，利用Retronectin重組人纖維蛋白可以使逆轉錄病毒介導的多藥耐藥基因的轉染效率達到20%，基本滿足了臨床治療的需要。
關鍵詞：外周造血干細胞; 純化; 擴增; 多藥耐藥基因;
[7] 楊建民,Michael S Friedman,李嶠,James J Mule,Alfred E Chang,Kevin T McDonagh.轉染嵌合性T細胞受體基因小鼠T淋巴細胞的體外抗腫瘤作用[J].中國腫瘤生物治療雜志,2006(04):243-248.
Retronectin重組人纖維蛋白結合離心法轉染經抗CD3/CD28單抗活化的小鼠T淋巴細胞,轉染效率可達50%以上。轉染嵌合性T細胞受體基因的小鼠T淋巴細胞在體外可通過細胞因子釋放和CTL效應發揮顯著的抗腫瘤作用。
關鍵詞：嵌合性T細胞受體; 基因轉染; 免疫治療; 小鼠; T淋巴細胞;
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