一套HPLC系統(tǒng)大致分為以下幾個部分：流動相前處理部分、輸液部分、進樣部分、分離部分、檢測部分。下面將分兩期介紹各部分的使用方法和注意事項，*期先介紹流動相前處理部分和輸液部分。

一、流動相前處理

流動相前處理主要包括過濾和脫氣，使用設(shè)備主要為溶劑過濾器、真空泵和超聲波。

1、過濾。HPLC所用流動相必須預(yù)先過濾和脫氣，過濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過濾時需要注意濾膜的選擇，油膜和水系膜必須分開使用。水膜易被有機溶劑溶解而進入系統(tǒng)導(dǎo)致泵流路和色譜柱頭的堵塞。

2、超聲。超聲的作用是去除流動相中的氣泡。超聲時間一般在15min即可。超聲后，液體溫度會升高，應(yīng)冷卻到室溫再使用。

二、輸液系統(tǒng)

輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定準(zhǔn)確的流速。泵的維護主要分為以下三個部分。

1、吸液過濾頭。吸液過濾頭，或稱沉子，主要作用是過濾流動相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長時間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過濾頭上的過濾板孔隙；或長時間使用緩沖液，過濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動相正常通過。嚴(yán)重時，即使是已超聲過的溶劑，泵吸液時也會有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生，因此應(yīng)經(jīng)常對過濾頭進行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。

2、單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個方向流動，是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過程中，可以通過觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時間（約30min），壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動，則表明流量不穩(wěn)定；如果無壓力，則表明無流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質(zhì)?；烊霘馀莸那闆r，應(yīng)把放空閥打開，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對其進行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時注意標(biāo)記環(huán)的方向。

單向閥裝配圖及剖面圖

1.帶標(biāo)記環(huán)閥外套；2.陶瓷座；3.寶石球；4.帶密封墊限位套；5.密封墊

3、密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏，是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長期使用會發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動相有關(guān)。當(dāng)使用含鹽的流動相時，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結(jié)晶，而泵運動時鹽結(jié)晶會導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實驗前和實驗后都需用純水沖洗一次密封圈（在柱塞密封圈和二級密封圈之間），保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體，延長柱塞桿和密封圈的使用壽命。

等度系統(tǒng)                            梯度系統(tǒng)

柱塞桿清洗連接示意圖

4、在線過濾器。為了防止由于流動相雜質(zhì)微粒進入色譜系統(tǒng)，放空閥內(nèi)安裝了在線過濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過在線過濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過在線過濾器。儀器使用一定時間后，建議用戶清洗在線過濾器的燒結(jié)不銹鋼過濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意過濾片的烘干處理。

在線過濾裝置示意圖

三、 進樣系統(tǒng)

進樣系統(tǒng)分為手動進樣閥和自動進樣器。

1、 手動進樣閥。對于手動進樣閥使用過程中需要注意每個樣品進樣完成后需要對進樣閥進行清洗，防止殘留對下一個樣品分析的影響。還需要注意進樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇*充滿定量管或部分充滿定量管。為了保證進樣的重復(fù)性，選擇*充滿定量管進樣方式時，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品；選擇部分充滿定量管進樣方式時，進樣體積應(yīng)在定量管體積一半以下，即1~10μL。

2、 自動進樣器。如果采用自動進樣器進樣，首先需要保證注射器里面沒有氣泡存在，否則影響進樣量準(zhǔn)確性；其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，保證進樣針能夠吸到樣品。為了避免交叉污染需要及時對樣品瓶、瓶蓋和瓶墊進行清洗。若自動進樣器長時間不使用，應(yīng)該注意腐蝕性的流動相或洗液（例如，堿性或酸性緩沖溶液）必須*從系統(tǒng)中置換出來，可以用大量溶劑清洗來完成，為了避免細(xì)菌生長，應(yīng)將一個樣品瓶中充滿甲醇，并重復(fù)幾次進樣操作。

四、 分離系統(tǒng)

分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護柱以及柱溫箱。

1、 色譜柱。色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說明書，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護方法等事項。色譜柱使用完后，需及時對色譜柱進行沖洗。沖洗完成后，應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來，兩端用廠家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里。

2、 保護柱。保護柱的作用主要是防止吸附性強的雜質(zhì)對色譜柱污染，從而延長色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱，應(yīng)選擇相對應(yīng)填料的保護柱。注意的地方是柱芯也是有壽命的，應(yīng)該定期進行更換。

3、 柱溫箱。色譜柱溫度變化，可能會導(dǎo)致保留時間的變化。為了避免這個問題，建議使用柱溫箱。

五、 檢測系統(tǒng)

HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護。

1、 檢測池。檢測池長時間使用可能會造成污染，如果儀器的參比能量（REF ENERGY）正常，測量能量（SMP ENERGY）偏低，可能為檢測池污染，可以對檢測池進行清洗。一般先采用約1：4的硝酸溶液超聲清洗，然后分別用純水和甲醇清洗，清洗后重新組裝并將檢測池池體推進池腔內(nèi)，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片一定要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測池漏液。

 檢測池組裝示意圖

1.檢測池前板；2.檢測池體；3.池體螺絲；4.池板螺絲；5.壓緊螺母；

6.壓緊螺母墊片；7.池玻璃；8. 池玻璃墊片

2、 氘燈。氘燈正常使用壽命可在1500小時以上。氘燈的使用壽命與其使用時間和開啟頻率有關(guān)，因此使用過程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開機時間，減少開關(guān)頻率，以延長氘燈的使用壽命。如果準(zhǔn)確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點亮或能量過低，需要更換新的氘燈。在購買氘燈時，應(yīng)注意咨詢和核對氘燈的型號與儀器型號相匹配。