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分析型液相色譜系統是有五大部分構成
分析型液相色譜系統是有五大部分構成:動力系統,進樣系統,分離系統,檢測系統,數據分析和記錄系統構成。其中動力系統是指泵;進樣系統是指六通閥和進樣針,或者自動進樣器;分離系統是指色譜柱;檢測系統是指檢測器,一般有紫外檢測器,熒光檢測器,示差折光檢測器,MS檢測器等等;記錄系統是指電腦工作站等,而連接這些設備的都是由一根根不銹鋼管或者PEEK管構成。
1、動力系統:
分析型液相色譜系統的動力,實際上是鋼瓶中氣體的壓力。而液體,它只有通過泵的轉動而使之流動。我們做一個類比:血液類比成流動相,心臟類比成泵。血管類比成各不銹鋼管。那么,血液在心臟作為動力系統,流經著身體的各個系統。如果心臟跳得快點,那么血流量加大,那么血壓升高。同樣,泵流速提高,流動相流量增大,那么色譜系統壓力增高;如果血管被壓迫半堵了,那么同樣的心跳速度,壓力也會增高。同樣道理,如果色譜系統被污染,那么污染物堵在色譜柱頭,或者各連接口等,那么泵同樣的流速,就有可能壓力變大。液相色譜主要出問題的就是壓力莫名地增大,一般認為是色譜系統被污染而堵,解決的方法就是查看各個部件,或者用過濾過的異丙醇清洗流路等。
2、進樣系統:
現在很少用到手動進樣了吧。大部分都用自動進樣。自動進樣確實方便,只要安排好配制過的樣品的位次,那么開動sequence run 就一個個地分析了。要不說說手動進樣吧。進樣設備是一個六通閥。其中要進樣的時候,需要將六通閥轉到load狀態,由于六通閥后面裝了一根定量環,所以,樣品一定以大于三倍定量環體積地進去,這樣,保證定量環中充滿著樣品,可以避免進樣誤差。打個比方,如果定量環是20μl的,那么我們打入>60μl的樣品。然后轉到inj狀態,即可。還有需要注意的是,HPLC 的進樣針是平頭針,而GC的進樣針一定是尖頭針。因為氣相進樣要刺穿隔墊,需呀尖頭,而尖頭容易劃傷金屬,所以分析型液相色譜系統用的是平頭針。
3、分離系統:
分離系統是分析型液相色譜系統的核心。我們現實生活中需要分析的樣品都是混合物。所以,分離后在分析。比如我們分析醬油中肌苷酸鳥苷酸,那么醬油進行稀釋處理,注入色譜儀,肌苷酸,鳥苷酸由于性質不同被分離成兩個峰。同時醬油中其他物質也被分離。使得肌苷酸,鳥苷酸兩個峰十分清楚地呈現。我們需要清楚的是,樣品的測試要保證測試的物質被有效地分離,而不需要測試的物質,沒有必要讓其分離,這可以節省分析時間。
4、檢測系統:
HPLC的檢測器有紫外-可見檢測器,(UV-VIS),熒光檢測器(FD),示差折光檢測器(RI),MS檢測器等等對于這些檢測器,簡單來說,是兩點:被檢測和濃度越大面積越大。對于示差折光,它是通用性檢測器,但是靈敏度不夠。測試一些沒有紫外基團的物質,比如如糖等。
5、記錄系統:
分析型液相色譜系統記錄系統主要記錄色譜圖,并且對色譜圖進行面積計算(積分)。同時可以用軟件計算出其他,比如峰寬,塔板數,拖尾因子等。同時也可以通過輸入稱樣量和稀釋倍數,計算出測試樣品中各組分的含量。