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Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)

產品描述
　　Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)是專門用于快速檢測細胞培養上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡單，反應時間短，只需吸取1 μl細胞培養上清加入反應體系中，60℃孵育1h，肉眼觀察即可判定結果，與傳統檢測支原體的PCR法優勢明顯。本試劑盒檢測范圍廣，可以檢測：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細胞的支原體(注：M.為Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上。絕大多數支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細胞生物學相關的科研實驗室及企業的日常支原體檢測。
訂購信息

保存方法
　　冰袋運輸，-20℃保存，保質期3年。
實驗操作流程
1.待測細胞培養上清收集
對于貼壁細胞，待測的樣品建議來源于至少培養三天以上且匯合度在70-90%左右的細胞培養上清，中途不再換液，此時上清中支原體含量較高，便于檢出，無需離心，直接吸取上清。對于懸浮培養的細胞，也需要在換液或者傳代后讓細胞生長3天以上，再取培養液進行檢測，也無需離心，哺乳動物細胞的存在不會影響檢測結果。
【注】：收集的待測細胞培養液樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存。樣品在-20℃至少可以保存一個月，在-80℃可以長期保存。
2.反應體系的配制
將溶液Ⅰ、Ⅲ從-20℃冰箱中取出，室溫放置待其融化，液態溶液Ⅱ需一直置于冰上備用。溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000 rpm離心30 s，用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合，吹打均勻后，按每管24 μL 的量分裝到0.2 mL透明度良好的薄壁PCR管中。接著，往陽性對照管(Positive)中加入1 μL 陽性支原體DNA，往陰性對照管(Negative)中加入1 μL 無菌水，往測試管(Test)中加入1 μL 待測細胞培養液，反應液的總體積為25 μL。
【注】：裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前，用迷你離心機離心下；進行反應體系配制的房間，與進行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間建議分開。
表1：恒溫反應體系的配制

【注】：每次實驗加上一個陰性對照、一個陽性對照，便于結果的判斷和分析。如有多個樣品，為了避免移液時損失，分裝時建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數1.08，保證每個反應管中的反應液足量。
3. 反應
PCR儀設置程序：61℃，60 min，熱蓋溫度，100 ℃。
【注】：若實驗室所沒有PCR儀，反應也可以在水浴鍋中進行，需要在每管中加入25 μL礦物油，以防止液體蒸發導致結果不準確。水浴鍋顯示溫度與實際溫度的溫差建議不超過0.5℃，放入已經升溫到61℃的水浴內，準確反應60 min。
4. 結果判斷
61℃反應60 min后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應管溶液顏色的變化，即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染(如圖1)。顏色反應如下圖所示，也可以以陰性對照與陽性對照作為參考。
【注】：在61℃反應的時間必須準確計時，多不得超過5 min，以免出現假陽性。反應產物不可開蓋，防止產生氣溶膠會導致假陽性的出現，必須在反應后2 h 內進行結果判斷，避免室溫下擴增反應進行，影響結果判別。在少數情況下(如支原體含量較低)，溶液顏色可能會介于紫色和天藍色之間，此時可將反應時間繼續延長到80 min，如果顏色變為藍色，則判定為陽性，否則為陰性。

               

產品圖片

注意事項
1．必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作。整個操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。
2．建議使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應該使用新開封的吸頭。
3．檢測過程中，用過的各類吸頭、離心管務必小心處理，應裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內。反應后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠離細胞房的獨立垃圾桶內。
4．如果細胞被支原體污染，可以選購本公司或其他供應商提供的去除試劑盡早去除。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)的優勢

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