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深度解析化學免疫發光分析儀的工作原理
深度解析化學免疫發光分析儀的工作原理
化學發光標記免疫分析，別稱：化學發光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。
化學免疫發光分析儀包含兩個部分， 即免疫反應系統和化學發光分析系統。
原理：利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化， 形成一個激發態的中間體， 當這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子(hM) , 利用發光信號測量儀器測量光量子產額。免疫反應系統是將發光物質（在反應劑激發下生成激發態中間體）直接標記在抗原（化學發光免疫分析） 或抗體（免疫化學發光分析） 上， 或酶作用于發光底物。
化學免疫發光分析儀中核心探測器件為光電倍增管（PMT），由單光子檢測并傳輸至放大器，并加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉化為數字電流，數字電流將發光信號由R232數據線傳輸給電腦并加以計算，得出臨床結果。
學發光標記免疫分析又稱化學發光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發光物質有吖啶酯類化合物——acridinium ester (AE) ,是有效的發光標記物 , 其通過起動發光試劑作用而發光, 強烈的直接發光在一秒鐘內完成,為快速的閃爍發光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析, 其化學反應簡單、快速、無須催化劑; 檢測小分子抗原采用競爭法 ,大分子抗原則采用夾心法 , 非特異性結合少, 本底低; 與大分子的結合不會減小所產生的光量, 從而增加靈敏度。
發光酶免疫分析法
從標記免疫分析角度, 化學發光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immuno assay, CLEIA ) , 應屬酶免疫分析, 只是酶反應的底物是發光劑,操作步驟與酶免分析*相同: 以酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體) 進行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物,在信號試劑作用下發光, 用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP) ,它們有各自的發光底物。
發光試劑
HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol) ,或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼) ,是一類重要的發光試劑。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧存在下,生成激發態中間體, 當其回到基態時發光, 其波長為425nm。
早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體) ,但標記后發光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體, 進行免疫反應后利用魯米諾作為發光底物, 在過氧化物酶和起動發光試劑作用下, 魯米諾發光, 發光強度依賴于酶免疫反應物中酶的濃度。
化學發光標記免疫分析，別稱：化學發光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。
化學免疫發光分析儀包含兩個部分， 即免疫反應系統和化學發光分析系統。
原理：利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化， 形成一個激發態的中間體， 當這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子(hM) , 利用發光信號測量儀器測量光量子產額。免疫反應系統是將發光物質（在反應劑激發下生成激發態中間體）直接標記在抗原（化學發光免疫分析） 或抗體（免疫化學發光分析） 上， 或酶作用于發光底物。
化學免疫發光分析儀中核心探測器件為光電倍增管（PMT），由單光子檢測并傳輸至放大器，并加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉化為數字電流，數字電流將發光信號由R232數據線傳輸給電腦并加以計算，得出臨床結果。
學發光標記免疫分析又稱化學發光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發光物質有吖啶酯類化合物——acridinium ester (AE) ,是有效的發光標記物 , 其通過起動發光試劑作用而發光, 強烈的直接發光在一秒鐘內完成,為快速的閃爍發光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析, 其化學反應簡單、快速、無須催化劑; 檢測小分子抗原采用競爭法 ,大分子抗原則采用夾心法 , 非特異性結合少, 本底低; 與大分子的結合不會減小所產生的光量, 從而增加靈敏度。
發光酶免疫分析法
從標記免疫分析角度, 化學發光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immuno assay, CLEIA ) , 應屬酶免疫分析, 只是酶反應的底物是發光劑,操作步驟與酶免分析*相同: 以酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體) 進行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物,在信號試劑作用下發光, 用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP) ,它們有各自的發光底物。
發光試劑
HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol) ,或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼) ,是一類重要的發光試劑。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧存在下,生成激發態中間體, 當其回到基態時發光, 其波長為425nm。
早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體) ,但標記后發光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體, 進行免疫反應后利用魯米諾作為發光底物, 在過氧化物酶和起動發光試劑作用下, 魯米諾發光, 發光強度依賴于酶免疫反應物中酶的濃度。