附件2
食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定
BJS 201706
1 范圍
本方法規定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯質譜測定方法。
本方法適用于包裝飲用水、液體乳、大米、胡蘿卜、哈密瓜、豬肉、魚肉、茶葉、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫學用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定。
2 原理
試樣經提取、離心后，上清液經固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯質譜測定，內標法定量。
3 試劑和材料
3.1 試劑
3.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。
3.1.2 甲醇（CH3OH）：色譜純。
3.1.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。
3.1.4 甲酸銨（HCOONH4）：液質聯用級。
3.1.5 超純水（H2O）：電阻率為 18.2MΩ·cm。
注：以上試劑在使用前均應做本底測試。
3.2 試劑配制
3.2.1 含 0.1%甲酸的水溶液：量取 1.0mL 甲酸（3.1.3）至 1000mL 容量瓶，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，混勻。
3.2.2 20mmol/L 甲酸銨溶液：稱取 0.63g 甲酸銨（3.1.4），用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至 500mL，混勻。
3.2.3 甲酸銨甲醇溶液：取 100mL 甲酸銨溶液（3.2.2），加入 200mL 甲醇（3.1.2），混勻。
3.3 標準品
3.3.1 氯酸鈉標準品：采用具有證書的標準品或高純試劑，純度＞99%。中文名稱、英文名稱、
CAS 登錄號、分子式、相對分子量詳見表 1。
3.3.2 高氯鈉鹽標準品：采用具有證書的標準品或高純試劑，純度＞99%。中文名稱、英文名稱、
CAS 登錄號、分子式、相對分子量詳見表 1。
表 1 氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱、英文名稱、CAS 登錄號、分子式、相對分子量
中文名稱 | 英文名稱 | CAS 登錄號 | 分子式 | 相對分子量 |
氯酸鈉 | Sodiumchlorate | 7775-09-9 | NaClO3 | 106.44 |
高氯酸鈉 | Sodiumperchlorate | 7601-89-0 | NaClO4 | 122.45 |
3.4 同位素內標
3.4.1 氯酸鹽同位素內標：氯酸鹽-18O3（200μg/mL，以氯酸根-18O3 離子計，北京振祥提供，
EURL-SRMLotNo:024），4℃保存。
3.4.2 高氯酸鹽同位素內標：高氯酸鹽-18O（4 100μg/mL，以高氯酸根-18O4離子計，美國劍橋提供，
CILOLM-7310-1.2），4℃保存。
3.5 標準溶液的配制
3.5.1 氯酸鹽標準儲備液（1mg/mL，以氯酸根計）：精密稱取氯酸鈉 0.128g（至 0.0001g），置于 100mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為 1mg/mL 標準儲備液，4℃保存。
3.5.2 高氯酸鹽標準儲備液（1mg/mL，以高氯酸根計）：精密稱取高氯酸鈉 0.123g（至 0.0001g），置于 100mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為 1mg/mL 標準儲備液，4℃保存。
3.5.3 混合標準中間液：分別準確量取 0.2mL 氯酸鹽標準儲備液（3.5.1）、0.1mL 高氯酸鹽標準儲備液（3.5.2），置于同一 100mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為 2.0µg/mL、1.0µg/mL 的混合標準中間液，4℃保存。
3.5.4 混合同位素內標液：分別準確量取 75µL 氯酸鹽同位素內標（3.4.1）、20µL 高氯酸鹽同位素內標（3.4.2）置于同一 10.0mL 容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽-18O3、高氯酸鹽-18O4濃度分別為 1500ng/mL、200ng/mL 的混合同位素內標液，4℃保存。
3.5.5 混合標準工作溶液：分別準確量取混合標準中間液（3.5.3）0μL、10μL、25μL、50μL、75μL、
100μL、250μL、500μL、750μL、1000μL，及混合同位素內標液（3.5.4）100μL，用甲酸銨甲醇溶液（3.2.3）稀釋并定容至 10mL，作為混合標準工作溶液 S0、S1—S9。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、
2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、 200ng/mL，高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、7.50ng/mL、
10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、75.0ng/mL、100ng/mL，混合標準工作液中氯酸鹽-18O3、高氯酸鹽-18O4 濃度分別為 15.0ng/mL、2.0ng/mL，或依需要配制適當濃度的混合標準工作液。臨用新制。
4 儀器和設備
4.1 液相色譜-串聯質譜儀，配有電噴霧離子源（ESI 源）。
4.2 渦旋振蕩器。
4.3 組織搗碎機。
4.4 均質器。
4.5 離心機：轉速≥10000r/min。
4.6 電子天平：感量分別為 0.0001g 和 0.001g。
4.7 超聲波恒溫水浴振蕩器。
4.8 具塞離心管：50mL。
4.9 PRiMEHLB 固相萃取柱：3cc，150mm，或性能相當者。
注：4.8、4.9 的耗材在使用前均應做本底測試。
5 試樣制備與保存
5.1 包裝飲用水
充分混勻，直接取用。
5.2 液體乳：
充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于4℃避光保存。
5.3 豬肉、魚肉：
取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于-18℃避光保存。
5.4 胡蘿卜、哈密瓜：
取適量有代表性的試樣，去皮去籽，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于-18℃避光保存。
5.5 嬰兒配方乳粉：
充分混勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于常溫避光保存。
5.6 大米、茶葉：
取適量有代表性的試樣，粉碎機粉碎后過40目篩，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于常溫避光保存。
6 測定步驟
6.1 提取
6.1.1 包裝飲用水：
準確移取1.0mL試樣，加入10.0µL混合同位素內標液（3.5.4），渦旋震蕩10s，經0.22µm再生纖維素濾膜過濾后，取續濾液供液相色譜-串聯質譜儀測定。
6.1.2 胡蘿卜、哈密瓜、茶葉：
準確稱取1g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200μL混合同位素內標液（3.5.4），準確加入7.0mL超純水（3.1.5），渦旋振蕩5min，再準確加入13.0mL甲醇（3.1.2），混勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。
6.1.3 大米：
準確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200μL混合同位素內標液（3.5.4），準確加入7.0mL超純水（3.1.5），渦旋振蕩5min，再準確加入13.0mL甲醇（3.1.2），混勻，振蕩超聲提取30min，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。
6.1.4 嬰兒配方乳粉：
準確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150μL混合同位素內標液（3.5.4），準確加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），迅速混勻，置于45℃水浴超聲20min，渦旋振蕩5min，再準確加入10.0mL甲醇（3.1.2），混勻，10000r/min常溫離心10min，取上清液待凈化。
6.1.5 液體乳：
準確稱取5g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150μL混合同位素內標液（3.5.4），加入1.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），9.0mL甲醇（3.1.2），渦旋振蕩5min，10000r/min 常溫離心10min，取上清液待凈化。
6.1.6 豬肉、魚肉：
準確稱取2g（至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200μL混合同位素內標液（3.5.4），準確加入7.0mL超純水（3.1.5），13.0mL甲醇（3.1.2），10000r/min均質30s，10000r/min 常溫離心10min，取上清液待凈化。
6.2 凈化
吸取約3.0mL上述上清液（6.1.2~6.1.6），按附錄A中的圖A.1方式過固相萃取柱（4.9）及0.22µm 再生纖維素濾膜，棄去約1mL流出液，收集續濾液，供液相色譜-串聯質譜儀測定。
6.3 色譜測定
6.3.1 液相色譜-串聯質譜檢測
6.3.1.1 參考液相色譜條件
a)色譜柱：AcclaimTRINITYP1 復合離子交換柱（50mm×2.1mm，3μm；100mm×2.1mm，3μm），或性能相當者。
b)流動相：A 為乙腈，B 為 20mmol/L 甲酸銨溶液。梯度洗脫程序見表 2。 c)樣品系列運行完后，按表 3 的色譜柱清洗梯度程序對色譜柱進行清洗。
d)流速：0.5mL/min
e)柱溫：35℃。
f)進樣量：3μL。
表 2 梯度洗脫程序
50mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱 | 100mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱 |
時間(min) | 流動相 A(%) | 流動相 B(%) | 時間(min) | 流動相 A(%) | 流動相 B(%) |
Initial | 35 | 65 | Initial | 70 | 30 |
0.5 | 35 | 65 | 0.2 | 70 | 30 |
4.0 | 65 | 35 | 3.0 | 90 | 10 |
5.0 | 90 | 10 | 7.0 | 90 | 10 |
7.0 | 90 | 10 | 8.0 | 70 | 30 |
8.0 | 35 | 65 | 10.0 | 70 | 30 |
表 3 色譜柱清洗梯度程序
| 50mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱 | | 100mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱 |
時間 (min) | 流速(mL/min) | 流動相 A(%) | 流動相 B(%) | 時間 (min) | 流速(mL/min) | 流動相 A(%) | 流動相 B(%) |
Initial | 0.5 | 35 | 65 | Initial | 0.5 | 70 | 30 |
10.0 | 0.15 | 90 | 10 | 15.0 | 0.15 | 90 | 10 |
100.0 | 0.15 | 90 | 10 | 150.0 | 0.15 | 90 | 10 |
注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長色譜柱壽命。
6.3.1.2 參考質譜條件
a)離子源：電噴霧離子源（ESI 源）。 b)檢測方式：多反應監測（MRM）。
c)掃描方式：負離子模式掃描。
d)毛細管電壓：200V。
e)錐孔電壓：60V。
f)脫溶劑溫度：500℃。
g)脫溶劑氣流量：1000L/h。
h)錐孔氣流量：150L/h。
i)采用多反應監測（MRM）模式采集數據，質譜參數見表 4。
表 4 氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對和質譜分析參數
化合物 | 母離子（m/z） | 子離子（m/z） | 錐孔電壓（V） | 碰撞能量（eV） |
氯酸根 | 83.0 | 67.0* | 60 | 15 |
85.0 | 69.0 | 60 | 15 |
高氯酸根 | 99.0 | 83.0* | 60 | 18 |
101.0 | 85.0 | 60 | 18 |
氯酸根內標 | 89.0 | 71.0* | 60 | 16 |
高氯酸根內標 | 107.0 | 89.0* | 60 | 18 |
*定量離子對。
注：6.3.1.2 的質譜條件僅供參考，當采用不同質譜儀器時，儀器參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到佳。
6.3.2 標準工作曲線制作
將混合標準工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.3.1）進行測定。以混合標準工作溶液的濃度為橫坐標，以內標校正后的響應值為縱坐標繪制標準工作曲線。
6.3.3 定性測定
在相同試驗條件下測定試樣和混合標準工作溶液，記錄試樣和混合標準工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽的色譜保留時間，以相對于強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與混合標準工作液（3.5.5）中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當的標準溶液中相應的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表5規定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應的氯酸鹽、高氯酸鹽。
表 5 定性確證時相對離子豐度的大允許偏差
相對離子豐度（%） | >50 | >20~50 | >10~20 | ≤10 |
允許的相對偏差（%） | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
6.3.4 定量測定
若試樣檢出與混合標準工作液（3.5.5）一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據標準工作曲線按內標法以內標校正后的響應值計算得到其含量。
空白樣品加標試樣參考色譜圖見附錄B中的圖B.1、B.2。
6.4 空白試驗
除不加試樣外，均按試樣同法操作。
7 結果計算
結果按式（1）計算：
………………………………………….(1)
式中：
X—試樣中各待測組分的含量，包裝飲用水單位為微克每升（µg/L)，其他樣品單位為微克每千克（µg/kg)；
c—從標準工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
V—試樣溶液終定容體積，單位為毫升（mL）； f—試樣制備過程中的稀釋倍數；
m—稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（mL），其他樣品單位為克（g）。
計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
8 檢測方法的靈敏度、準確度、精密度
8.1 靈敏度
當試樣量為 1.0mL 時，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為 0.6μg/L、定量限為 2.0μg/L；高氯酸鹽的檢出限為 0.4μg/L、定量限為 1.0μg/L。
當試樣量為 1g（至 0.001g）、定容體積為 20.0mL 時，胡蘿卜、哈密瓜、茶葉中氯酸鹽
的檢出限為 12.0μg/kg、定量限為 40.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為 8.0μg/kg、定量限為 20.0μg/kg。
當試樣量為 2g（至 0.001g）、定容體積為 20.0mL 時，豬肉、魚肉、大米中氯酸鹽的檢
出限為 6.0μg/kg、定量限為 20.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為 4.0μg/kg、定量限為 10.0μg/kg。
當試樣量為5（至g 0.001g）、定容體積為15.0mL時，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8μg/kg、定量限為 6.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為 1.2μg/kg、定量限為 3.0μg/kg。
當試樣量為 2g（至 0.001g）、定容體積為 15.0mL 時，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限為 4.5μg/kg、定量限為 15.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為 3.0μg/kg、定量限為 7.5μg/kg。
8.2 準確度
本方法在 5~800µg/kg 添加濃度范圍內，回收率為 80%~110%。
8.3 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的差值不得超過算術平均值的 20%。
A
附錄A
凈化方式示意圖
圖A.1 9 種基質樣液凈化方式示意圖
A
附錄B
氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖
圖A.2 氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖（50mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱）
注：氯酸鹽-18O3內標、氯酸鹽特征離子色譜圖中，3.05min處為高氯酸鹽-18O4內標、高氯酸鹽的碎片離子峰。
圖A.3 氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖（100mm×2.1mm，3μm 規格色譜柱）
注：氯酸鹽-18O3 內標、氯酸鹽特征離子色譜圖中，2.65、2.64min 處為高氯酸鹽-18O4 內標、高氯酸鹽的碎片離子峰。
