安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉以及脫氫乙酸均為食品添加劑，安賽蜜、糖精鈉為甜味劑，苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸為防腐劑。我們這次嘗試將五種食品添加劑共同分析，以提高檢測效率。
GB5009.28-2016條件下分析
首先，我們嘗試按照GB5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定項下方法，使用SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色譜柱，對安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸混合標準品進行分析。
結果如下圖所示，在國標原條件下可達到五種物質分離度大于2.5的良好分離結果（峰上所標數值為分離度）。
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：20 mmol/L 乙酸銨：甲醇=95:5
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：各約0.1 mg/mL
進樣量：10 µL
隨后，我們嘗試使用SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色譜柱在相同條件下，對市售飲料及糕點實際樣品進行分析，結果如下圖所示，飲料樣品中未檢出五種添加劑，糕點樣品中可檢出山梨酸、脫氫乙酸峰，整體分離結果及峰形良好。
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：20 mmol/L 乙酸銨：甲醇=95:5
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：40 mg/mL
進樣量：10 µL
樣品：飲料樣品：以水為稀釋劑稀釋至40 mg/mL；糕點樣品：稱取樣品400 mg于10 mL容量瓶中，加5 mL水超聲20min，冷卻后加入400 µL 92 g/L的和400 µL 183 g/L的乙酸鋅溶液，加水定容超聲5 min，離心，過濾。
國標原流動相基礎上加甲酸進行分析
為了進一步改善脫氫乙酸峰形及各物質間分離，我們嘗試在國標流動相基礎上加入2 mmol/L甲酸，同時為避免酸性物質保留過強，采用梯度洗脫的方式來進行分析。結果表示，本方法可在20 min內得到五種物質分離度大于4.9的良好分離結果，且各峰峰形均得到明顯改善。但由于甲酸的加入導致出峰順序有所改變，苯甲酸、山梨酸保留有所延長。
下圖分別為采用此流動相方法分別對混合標準品和實際樣品的分析結果。
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：A：20 mmol/L 乙酸銨+2 mmol/L甲酸 B：甲醇
B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：各約0.1 mg/mL
進樣量：10 µL
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：A：20 mmol/L 乙酸銨+2 mmol/L甲酸 B：甲醇
B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：40 mg/mL
進樣量：10 µL
樣品：飲料樣品：以水為稀釋劑稀釋至40 mg/mL；
糕點樣品：稱取樣品400 mg于10 mL容量瓶中，加5 mL水超聲20 min，冷卻后加入400 µL 92 g/L的亞鐵和400 µL 183 g/L的乙酸鋅溶液，加水定容超聲5 min，離心，過濾。
使用4.6x150 mm規格色譜柱進行分析
為了縮短分析時間，我們也嘗試使用GB5009.28-2016方法以及上面提到的國標原流動相基礎上加甲酸的方法，使用4.6x150 mm規格的SUPERIOREX ODS色譜柱，對安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸混合標準品進行分析。如下面結果所示，使用150 mm柱長的色譜柱，可以縮短分析的時間。
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×150 mm
流動相：20 mmol/L 乙酸銨：甲醇=95:5
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸各約0.1mg/mL；山梨酸、脫氫乙酸各約0.067 mg/mL
進樣量：10 µL
HPLC Conditions ：
色譜柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×150 mm
流動相：A：20 mmol/L 乙酸銨+2 mmol/L甲酸 B：甲醇
B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)
流速：1.0 mL / min
溫度：35 °C
檢測：PDA 230 nm
濃度：各約0.1 mg/mL
進樣量：10 µL
總結
綜上所述，按照GB5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定項下方法，無論使用柱長150 mm還是250 mm的SUPERIOREX ODS色譜柱，均可得到安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉以及脫氫乙酸五種食品添加劑混合標準品的基線分離結果。
流動相中加酸的梯度條件可明顯改善色譜峰形及分離，但苯甲酸、山梨酸保留會變強，五種物質出峰順序較國標原方法會有所變化。若想進一步改善糖精鈉、苯甲酸之間的分離度，可適當延長初始有機相運行時間。
本次所選的飲料樣品中不含本次檢測的五種食品添加劑；糕點樣品中檢出山梨酸、脫氫乙酸。使用250 mm柱長的SUPERIOREX ODS色譜柱可得到兩種樣品的良好分析結果。
由于食品樣品多種多樣，本次只選擇兩種樣品，很難說具有廣泛代表性，客戶可根據自己的樣品情況對分析條件進行進一步優化。
