目錄:合肥恩派爾貿易有限公司>>Abnbio感受態細胞>>發根(熱激)感受態>> Ar A4Chemically發根(熱激)感受態
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100支100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | ABN400-100 | 應用領域 | 化工,生物產業,制藥 |
| 主要用途 | 細胞培養 |
Ar A4 Chemically Competent Cell 發根(熱激)感受態細胞
基因型：
Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
簡要說明：
發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時具有ka那霉素抗性。Ar.A4化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pK7WGF2質粒（zhuang觀霉素抗性）檢測，轉化效率>104 cfu/μg DNA。
操作說明：
一：取-80℃保存的Ar A4發根農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。
二：每100μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量），用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻，依 次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
三：冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY 液體培養基，于 28℃振蕩培養 2小時。
四：6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培養箱培養 2-3 天
注意事項：
一：加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
二：混勻質粒時應用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻，務必使質粒快速、均勻分散開，與感受態細胞充分接觸。轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌 量。
三：平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或降低涂板的菌量。
四：Ar.A4具有ka那霉素抗性，不可用于具有ka那霉素抗性質粒的轉化。
備注：
1、農桿菌相關抗生素配方：
2、常用農桿菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
3、TY配方（1L）：
Tryptone 5gYeast extract 3g補水到1L體積，wan全溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌每1L 滅菌的TY液體營養液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。若配制TY固體培養基，則加入15g 瓊脂粉
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