實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:DMEM(無酚紅)基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞
英文名稱:DMEM(無酚紅)
貨號(hào):BJ-01X1987
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,*進(jìn)口來源,*保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
豬腦紅蛋白(NGB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化鑭(1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-蒎烷二 99%硝鈰,六水 99.95% metals basis
豬骨成型蛋白1(BMP-1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 化鑭四化碲 99%醋鈰 99.9% metals basis
豬肌球蛋白輕鏈激(MLCK/MYLK)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化釹(三氟)三硅烷 96%硝鉺,五水 99.9% metals basis
豬補(bǔ)體因子H(CFH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化釹(三氟)三硅烷 0.5 M in THF硫鉺(III)八水化合物 99.9% metals basis
豬磷脂D2(PLD2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒羥高鐵血紅素三乙三氫氟鹽 97%硝釓,六水 AR,99%
豬胰腺特異性轉(zhuǎn)錄因子1α (PTF1α)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒羥高鐵血紅素啶蟲脒 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%硝釓,六水 99.99% metals basis
豬抑肽(AP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二200殺螟丹硝鎵(III) 水合物 99.9% metals basis
豬磷脂酰肌蛋白聚糖1(GPC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二300芐嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品硝鎵(III) 水合物 99.99% metals basis
豬硒蛋白1(SEP1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒聚乙二400芐嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3硝鎵(III) 水合物 99.999% metals basis
豬軸蛋白抑制蛋白2(AXIN2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒聚乙二600草除靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%硝釓,六水 99.9% metals basis
豬肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二800多菌靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%化銦 98%
豬成纖維生長因子結(jié)合蛋白1(FGFBP1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒聚乙二1000多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3% 化銦 99.99% metals basis
豬抗氨酰tRNA合成抗體(Anti-AlaRS/Anti-PL12)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二1500多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%化鑭,七水 AR
豬緊密連接蛋白Claudin 4(CLDN4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二2000死蜱 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%硝鑭 99.9% metals basis
豬C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二4000死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6~3%,化鑭,無水 99.9% metals basis,顆粒
豬降鈣素受體(CTR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙二6000死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=6~3%,硝釹,六水 99.9% metals basis
DMEM(無酚紅)基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞骨髓質(zhì)干抗原2抗體膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒GDNF
組蛋白相關(guān)Bmi1抗體性成纖維細(xì)胞生長因子9(FGF9)檢測試劑盒FGF9
癌轉(zhuǎn)移抑制因1抗體激活素A(Activin A)檢測試劑盒Activin A
大腦富含鳥苷激相關(guān)蛋白抗體活化素A(Activin-A)檢測試劑盒Activin-A
腦富含膜附著信號(hào)蛋白1抗體核心蛋白聚糖(DCN)檢測試劑盒DCN
卵黃狀黃斑病蛋白3抗體肝細(xì)胞生長因子受體(c-MET/HGFR)檢測試劑盒c-MET/HGFR
卵黃狀黃斑病蛋白抗體分化簇抗原30配體(CD30L)檢測試劑盒CD30L
卵黃狀黃斑病蛋白4抗體二肽肽IV(DPP4/CD26)檢測試劑盒DPP4/CD26
炭疽桿菌菌體蛋白抗體二肽肽4(DPP4/CD26)檢測試劑盒DPP4/CD26