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大鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞)

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更新時間:2023-04-23 08:51:28瀏覽次數:247

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 骨髓
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詳細介紹

產品屬性:

產品名稱

規格

組織來源

大鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞)

5×105cells/T25細胞培養瓶

骨髓

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網眼中,是一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的;樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態不規則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成,多數呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養也可能導致自發分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節;未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應答,不能激活T細胞的第二信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的經CD86免疫熒光鑒定、細胞形態等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  半貼半懸浮

細胞形態  圓形、梭形、多角形,形態多樣

傳代特性  屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群

消化液  0.25%胰dan白

培養條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

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實驗報告:

一、分離與培養:

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
   5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

 

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基,90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

鋅指蛋白749抗體 促血管平滑肌細胞分化因子封閉多肽 

IZUMO4蛋白抗體 先心病相關蛋白TBX1封閉多肽 

細胞色P450 4A1抗體 重組豬圓環病毒CAP蛋白 

粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體 核因子κB抑制蛋白δ封閉多肽 

RAS相關抑細胞生長蛋白1抗體 C-肽封閉多肽 

干擾α17抗體 脫氧核糖核1封閉多肽 

腦富含膜附著信號蛋白1抗體 軟骨糖蛋白39封閉多肽 

磷化周期依賴性激2抗體 重組人重組甲狀旁腺激受體蛋白   

溶質載體家族16成員8抗體 驅動蛋白家族成員22封閉多肽 

脫氫10抗體 CYLC2蛋白封閉多肽 

SCAND3蛋白抗體 真核翻譯起始因子1A封閉多肽 

血小板源性生長因子C抗體 INO80E蛋白封閉多肽 

腺嘌呤核苷轉運蛋白1、2、3、4抗體 富含脯氨蛋白19封閉多肽 

TBC結構域TB10A蛋白抗體 環指蛋白19封閉多肽 

胃泌/蛙皮抗體 A型流感病毒核輸出蛋白封閉多肽 

微小染色體維持缺陷蛋白5抗體 CD8封閉多肽 

絲裂原活化蛋白激激8抗體 二磷腺苷核糖基化因子核苷交換因子2封閉多肽 

磷化p21激活激6抗體 血管內皮生長因子A封閉多肽 
大鼠骨髓樹突狀細胞(未成熟DC細胞)TPC-1細胞專用培養基125mL×4TPC-1細胞專用培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持TPC-1細胞佳的生長狀態。本產品中已包含TPC-1細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于TPC-1細胞的體外培養。

大鼠腎小球系膜細胞培養基100mL大鼠腎小球系膜細胞培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持大鼠腎小球系膜細胞佳的生長狀態。本產品中已包含大鼠腎小球系膜細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于大鼠腎小球系膜細胞的體外培養。

SW579 [SW 579; SW-579]細胞專用培養基(L15)125mL×4SW579 [SW 579; SW-579]細胞專用培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持SW579 [SW 579; SW-579]細胞佳的生長狀態。本產品中已包含SW579 [SW 579; SW-579]細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于SW579 [SW 579; SW-579]細胞的體外培養。

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞專用培養基125mL×4P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞專用培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞佳的生長狀態。本產品中已包含P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞的體外培養。

兔骺軟骨細胞培養基100mL兔骺軟骨細胞培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持兔骺軟骨細胞佳的生長狀態。本產品中已包含兔骺軟骨細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于兔骺軟骨細胞的體外培養。

小鼠海綿體內皮細胞培養基100mL小鼠海綿體內皮細胞培養基由技術團隊精心優化,經過長期測試,本產品可保持小鼠海綿體內皮細胞佳的生長狀態。本產品中已包含小鼠海綿體內皮細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于小鼠海綿體內皮細胞的體外培養。

MEM無糖 (含NEAA、HEPES,不含L-、酚紅)500mL-

 


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